寄生虫低温保存的研究现状-第三军医大学学报.doc

寄生虫低温保存的研究现状 王爱民 周国燕 （上海理工大学低温医学与食品冷冻研究所，中国 上海 200093） 摘要：低温保存寄生虫可消除传统保存方法的弊端，寄生低温保存rogress of Cryopreservation of Parasites WANG Ai-min ZHOU Guo-yan (Institute of Cryo-medicine and Food Refrigeration, Shanghai University of Science and Technology， Shanghai 200093, China ) Abstract: The cryopreservation of parasites not only can eliminate limitations, but also can maintain the original biological characteristics of parasites. In this paper, the research progress of cryopreservation of protozoa and worms parasites is summarized, of which the cryoprotectant, freezing processes and thawing processes are mainly discussed. And the conclusion is got that the most important factors of cryopreservation of parasites are cryoprotectant, freezing and thawing rates. Some key subjects of further research are pointed out. Keyword: cryopreservation, parasites, cryoprotectant, freezing processes, thawing processes 寄生虫[1]是寄生在另一种动物体内来获取维持其生存、发育和繁殖所需的营养物质，并对寄生动物造成损害的一种生物。十九世纪二三十年代，人们开始研究犬恶丝虫微丝蚴和猴疟原虫红内期保存。传统的寄生虫保存方法[2,3]有体外培养和动物转种，这些方法价格昂贵，繁琐，而且有一定的风险，往往容易发生遗传漂变、人为差错或混淆等问题。随着冷冻技术的发展以及液氮的使用，寄生虫的低温保存技术也发展起来。低温保存技术不仅能消除传统方法的弊端，而且能延长存活时间，保持原有的生物学特性。低温保存寄生虫可用于寄生虫的形态结构、生活史、致病性以及寄生虫病的药物筛选、免疫诊断和免疫预防，也为建立“寄生虫库”提供了简便、实用而有效的方法，具有重要的使用价值和经济意义。 1 寄生虫低温保存的种类 近些年来，寄生虫的低温保存研究主要是原虫和蠕虫的研究 原虫类是寄生虫低温保存中研究比较早的一个种类，在20世纪70年代出现了许多与此有关的研究报道[4]。目前，有关原虫类低温保存的研究报道很多，主要有利什曼原虫、疟原虫、弓形虫等。成功保存利什曼原虫前鞭毛体以及感染杜氏利什曼原虫的地鼠组织后，学者对利什曼原虫的低温保存进行了更多的研究[5]。疟原虫的研究早期主要集中在红内期和子孢子器，到20世纪70年代，成功用伯氏鼠作为载体低温保存疟原虫，随后在90年代疟原虫配子体成功保存[6]。这些成果为恶性疟原虫的体外连续培养奠定了基础，也为随后的体外筛选、抗体疫苗的研究以及基因组的研究提供了很大的方便。之后研究者对疟原虫的低温保存条件进行了更多研究，如用血液或者动物组织进行低温保存，并探讨了不加抗冻剂的低温保存的方法[7]。弓形虫的低温保存已经很普遍 [8,9]，主要研究速殖子，大多采用感染小鼠腹水加抗冻剂进行保存。其它原虫类的寄生虫如阿米巴原虫、人毛滴虫等的低温保存也有研究。如Fulton[10]等人用甘油作抗冻剂，成功的对阿米巴滋养体进行了低温保存。 寄生蠕虫低温保存的研究 目前，寄生蠕虫的低温保存研究主要针对三个阶段：虫卵、幼虫、成虫。其中丝虫、吸虫的研究比较全面。 丝虫是研究比较早的品种。在20世纪60年代以前，丝虫的冷冻以不加任何抗冻剂为主，且多数集中在丝虫微丝蚴方面[11,12]，60年代以后对添加低温抗冻剂进行了探索。首先使用的是DMSO，进行冷冻保存实验，效果很好。70年代以后，抗冻剂等因素被广泛考虑，并开始研究各种类丝虫微丝蚴的低温保存[13]。如彭亨丝虫微丝蚴、马来丝虫微丝蚴、多种盘尾微丝蚴、旋盘尾丝虫，都获得了成功。但对于丝虫成虫的低温保存到80年