临床微生物实验室标准化操作.docVIP

临床微生物实验室标准化操作 临床微生物实验室质量控制环节 分析后 紧急报告 标本留取、 分析前 运送 分析前 标本合格判定 培养基、试剂 仪器设备 分析中 基本要求 准确报告培养结果的局限性 1)与微生物检验人员的专业程度密切相关，能够认识、评价、和追踪有意义的培养细菌； 2）可能造成假阴性结果的原因—— ?延误了培养时间； ?培养环境错误，如温度和气体 ?培养基不支持微生物的生长 ?病原菌数量很少，或标本量不够检出?WBCs和其他身体免疫因子抑制生长 ?采集和运输标本不理想 ?在当时所有培养方法不能培养的微生物 准确报告培养结果的局限性 3）可能造成假阳性结果的原因——?不同患者标本混淆 ?报告了污染菌(从实验室或标本采集过程中) 4）没有分离到病原菌—— 也不表明实验室不能检测，其他的疾病也可能有象感染性疾病的症状 2、正确的运送方式(sop) （运送工具和有效时间及储存方法等） ?标本因冷藏及pH改变或在氧气中暴露，可能减少很多种细菌的存活时间 脑膜炎球菌，淋病奈瑟菌， 流感嗜血杆菌，肺炎链球菌， 沙门菌，志贺氏菌， 霍乱弧菌，空肠弯曲菌及厌养菌 ?定量评价细菌数量的培养（尿标本）（运送时间） 对环境敏感菌株在运送中数量快速减少时，如果运送时间太长，其它菌则成倍增长，目标细菌可同其它菌一起过度生长。 需进行细菌学检测的所有标本， 应在收集后2小时内送到实验室 分析前常被忽视的重要环节—— 标本处理 同时接收各类细菌学标本处理顺序 ?首先应考虑标本类型和解剖学来源。 ?其次要选择每种类型标本应使用的基础分离培养基。 ?最后选择培养温度和气体条件。 ?在处理所有标本时，除尿标本外，常规培养都应该在生物安全柜中进行。 ?最重要的标本必须最先接种培养基。 ?通过手术等侵入性手段采集的标本要以最快的速度接种培养。 ?延误接种和处理某些标本会影响培养质量及分离出病原菌的能力。 标本预处理 总是选择标本最脓的部分接种培养和涂片。1体液（除外尿液） 1）正常无菌体液 ?澄清体液用细胞离心机浓缩涂片 ?此外培养时，需接种平板和肉汤培养，标本和肉汤比为1:10. ?关节和腹腔液标本，标本培养量需10ml. ?对于需氧菌，培养时标本接种量大比标本离心后接种培养阳性率更高。 ?通常关节液和腹腔液接种需氧血培养瓶和厌氧血培养瓶各10ml可提高阳性培养率。 2）用试子采集的其他液体标本，接种平板和涂片 2 试子 拒收未使用运送培养基的干燥试子 ?用试子划平板第一区，如果有两个试子标本，则用另一个涂片。 ?若只有一个试子，需要接种几个平板，并涂片 将试子置于少量肉汤中，并涡旋，将挤干试子，用加样器取标本接种平板和涂片。 3 异体装置 对于假体标本和手术取出的假体无可见组织或脓汁的培养—— ?将肉汤加入无菌的盛标本的容器；?在35℃培养18h； ?将培养肉汤传代并G染色，保留剩余肉汤和培养物。 ?若标本来自生殖道（如子宫内装置），在加入肉汤前将标本接种巧克力平板和厌氧平板。 临床常见标本的标准化操作 脑脊液（CSF)培养 主要病原菌：B群β溶血链球菌（新生儿），流感嗜血杆菌（2月-2岁儿 童），肺炎链球菌，脑膜炎奈瑟氏菌 #1 医生通过无菌皮肤 穿刺采集脑脊液 （腰椎穿刺）于无 菌管中。第二管和 第三管用于微生物 学检测。 最少1ml，最佳gt;5ml #2 1500×g离心15分钟 （可能的话） #7 将一大滴沉淀 滴在玻片上。 不要涂开。 自然干燥并进行革兰染色。 如见到大量多形核白细胞则 强烈支持感染 用吸管吸去 上清，留下 1cc的脑脊液沉淀 #3 注意：不要倾倒 #6 CO2中孵 育72小时 #5 滴一滴沉淀 于巧克力平皿和 血平皿 #4 上下吸取 10次以上 混匀沉淀 ? Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution 评价呼吸道标本（痰和气管内吸取物） 革兰染色结果的几种模式 ?筛查：在低倍镜（100 x）下观察鳞状上皮细胞的数量