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微生物的培养与鉴定实验报告 刘琳 1131428 环境科学 同组：陈氏秋张 实验目的 学习微生物（细菌）鉴定的原理和方法。 掌握微生物（细菌）的快速鉴定操作步骤与自动化分析技术。 利用所学知识，分析并掌握微生物（细菌）的鉴定思路。 强化生物学知识，提高学生动手操作能力。 实验原理 细菌鉴定是细菌分类学中最实用的部分，与工、农业生产及人类生活有着密切的联系。在动、植物检疫，食品卫生检验，人类及动、植物病原诊断，环境微生物学研究等领域均需要细菌鉴定方面的工作。 细菌的鉴定是确定一个新的分离物是否属于一个已被命名的分类单元的过程。主要包括分离培养、显微镜观察、生理生化试验、血清学检验和动、植物接种等环节或技术。此外，还有噬菌体敏感性及抗生素敏感性试验等。 细菌鉴定首先要有一个分类系统做基础。根据这个分类系统，找出各分类单元间相互区分的一系列特征，构成一个鉴定系统，即细菌鉴定的检索表。换言之，检索表由一系列有关细菌特征的问题构成，这些问题引导人们通过一个分类系统来确定一个菌株的分类地位。检索表有双歧式和表格式两种形式。本实验采用表格式检索表。 表格式检索表(鉴定特征表) 只对分类群的特征进行总结。而不给分类特征以等级化的排列。表格式检索表往往包含较多的性状特征，因而看起来比双歧式复杂。但比双歧式优越。表格中记为“﹢”的结果是该分类单元中90％以上的成员为阳性的特征。因此，允许被鉴定对象的个别特征不确定。 实验材料 器材：ID32E接种条、6cm培养皿、接种环、火焰灯、接种台、恒温培养箱、ATB Expression仪、移液管、移液枪 药剂：生理盐水、培养18~24h的接种菌、石蜡油、James 指示剂 实验步骤 准备好ID32E接种条、6cm培养皿、接种环、火焰灯、移液管、移液枪、接种菌、石蜡油、生理盐水等用品，放到接种台上，并打开火焰灯。 用移液管移取5ml的生理盐水加入到6cm培养皿中。 把接种环放到火焰灯上烧红（保证细菌全部烧死），之后在旁边冷却，等温度降至100°左右时放入接种菌试管中的琼脂部分再冷却至常温，之后挑取接种菌，并放到培养皿中涂布均匀。 用移液枪移取培养皿中稀释的细菌液，然后滴在ID32E接种条上的32个孔中（每个孔55微升）。 在接种条上的0—6号滴一滴石蜡油，保证其孔成厌氧状态。 盖好接种条的盖子，放入37°恒温培养相中培养24小时。注意：要保持湿润。 24小时后，取出ID32E接种条，在IND孔上加入James 指示剂，并在API鉴定系统鉴定，打印出鉴定结果。 实验结果记录并整理 API鉴定系统鉴定ID32E接种条鉴定结果如下： ODCADHLDCURELARLGAT5KGLIP－－－－－+－－RPBGLUMANMALINDBNAGBGALGLU++++？—+SACLARADARLaGLUaGALTRERHAINO？+－－－++－ADOPLEBGURCELSORaMALMNTAspA－－+－+－－－好的鉴定结果： 大肠埃希菌--------------------------------------可信度=98.3置信区间=0.26 克氏耶尔森菌------------------------------------可信度=0.7 置信区间=0.04 大肠埃希菌：不符实验数=3 LYSINE DECARBOXYLASEΒ-GLUCOSIDASEa-GALACTOSIDASELDCBGLUaGAL81%5%99%克氏耶尔森菌：不符合实验数=4 UREASERHAMNOSEβ-GLUCURONIDASEELLOBIOSEURERHA BGURCEL89%0%24%89% 实验结果讨论 由鉴定结果可以看出：所鉴定的细菌是大肠埃希菌的可信度为98.3%，是克氏耶尔森菌的可信度为0.7%。若是大肠埃希菌，则有3个实验不符合；若是克氏耶尔森菌则有4个实验不符合。从这里我们可以明显给出结论：我们所鉴定的细菌为大肠埃希菌。 由结果可以看出，虽然在IND 和SAC两个指标上因颜色不明显而无法判断，但并未对最终的结果判定产生很大影响。根据与伯杰细菌手册对比发现，SAC指标对于一个种的不同菌株会有不同反应，因此对于其准确度要求并不高。对于IND，手册中显示为阳性，但在本次试验中并未测定。可见该指标在鉴定系统中的重要性较低，并未必要性指标。在不符合试验的结果中发现， LDC、aGAL和BGLU不符合概率分别达到了81%、99%和5%。LDC在结果中呈现阴性，在手册中表明应呈现阳性，所以，LDC的结果属于严重不符合的结果。aG