磁珠法尿液基因组DNA提取试剂盒说明.docVIP

磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案 磁珠法尿液基因组DNA提取试剂盒 磁珠法尿液基因组DNA提取试剂盒 MagBeads Urine DNA Extraction Kit 【目 录 号】UDE-5010、UDE-5030、UDE-5100 【运输条件】2~25℃； 【保存条件】磁珠分散液 2~8℃，蛋白酶K -20℃，其它组分室温； 【试剂盒组成】 Kit Component 试剂盒组成UDE-5010 （100T）UDE-5030 （300T）UDE-5100 （1000T） Magnetic Beads 磁珠悬浮液7.5mL22.5mL75mL UDE Buffer ML 裂解液40mL120mL400mL Wash Buffer 1 清洗液160mL180mL600mL Proteinase K 蛋白酶K2mL6mL20mL Elute Buffer 洗脱液10mL30mL100mL 【注意事项】 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀； 蛋白酶K长期不使用，请置于-20℃保存，融化后4℃保存，并尽快使用； 尿液样本应避免反复冻融，否则会导致核酸提取得量降低； 本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并按照操作指南建议操作。 1 【产品简介】 本试剂盒适用于从新鲜或冷冻尿液样本中提取基因组DNA，在裂解液（UDE Buffer ML）环境中，基因组DNA特异性的结合于磁珠表面，经过清洗和洗脱等步骤之后，可得到高纯度的基因组DNA产物，OD260/280的比值在1.7~1.9之间，OD260/230的比值大于1.8，完整性好，整个操作过程简单、快速且高效。所得产物可直接用作PCR模板、杂交等下游分子生物学实验。 本试剂盒可手动法在EP管中进行操作，亦可配合核酸提取仪使用，实现自动化、高通量操作。 【试剂盒说明】 样本类型样本量DNA提取范围浓缩尿液1mL0~15μg【自备仪器、耗材和试剂】 手动版 涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、EP管（2.0mL）、磁力架（适用于EP管）、无水乙醇、异丙醇、磷酸缓冲盐溶液（pH值7.4）。 仪器自动版 涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、核酸提取仪、96孔方孔圆底板、EP管（2.0mL）、无水乙醇、异丙醇，磷酸缓冲盐溶液（pH值7.4）。 【手动版操作步骤】 尿样前处理 取10.0~15.0mL原尿，室温、5000rpm离心10min，吸弃上清液至剩余约1mL液体； 将上述样本转移至2.0mL EP管中，室温、10000rpm离心2min，吸弃上清液； 向EP管中加入500μL PBS溶液，颠倒混匀3次，室温、10000rpm离心2min，吸弃上清液。 尿样裂解 向EP管中加入400μL裂解液和20μL蛋白酶K，涡旋振荡充分混匀内容物。置于58℃环境中裂解35min，每隔5min颠倒混匀一次。 核酸与磁珠结合 向裂解完毕EP管中加入75μL磁珠悬浮液（提前摇匀）和400μL异丙醇，涡旋振荡10min。 2 磁性分离 将EP管置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全，如EP管内盖有残留磁珠，可保持EP管在磁力架上，上下颠倒2~3次，磁珠可完全被磁力架吸附。保持EP管于磁力架上，吸弃上清液，期间避免接触磁珠。 清洗1 向EP管中加入600μL清洗液1，将EP管从磁力架上取下，剧烈震摇或吹打使磁珠充分分散，涡旋震荡2min，磁性分离（参照步骤4操作）。 注：若磁珠出现团聚现象，为DNA含量多引起，不影响核酸提取效果。 清洗2 使用600μL 80%乙醇，参照步骤5操作2次。 干燥除醇 将清洗完毕并除尽上清液后的EP管置于磁力架上，连同磁力架一起放入45℃真空干燥箱中，干燥约10min至无明显乙醇味。 注：若无真空干燥箱，也可将EP管置于通风橱通风或电风扇直吹约10min，具体时间以除醇完全为原则。 洗脱 取出EP管，加入100μL洗脱液，移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀，将EP管于58℃环境中洗脱10min，每隔3min涡旋振荡30s，确保磁珠与核酸洗脱完全。 核酸转移 将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP管中，提取步骤完毕，此时可以弃去磁珠。 【仪器自动版操作步骤】 以下操作步骤以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32个样本的提取工作。 准备96孔板 样品位1、72、83、94、105、116、12试剂磁珠悬浮液：75μL 80%乙醇：200μL异丙醇400μL清洗液1600μL80%乙醇600μL80%乙醇600μL洗脱液100μL参照下表用量