cDNA-AFLP技术原理及其在研究植物基因差异表达中的应用.PDFVIP

????年 第 ?? 卷 第 ? 期 生 物 学 通 报 ?? ????? ???? 技术原理及其在研究植物基因差异表达中的应用 王 锋 ? 北 京 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院 北 京 ??????? 摘要 ????? ???? 是一种在转录水平研究基因表达的技术 ? 因 其 具 有 灵 敏 度 高 ? 重 复 性 好 的 特 点? 已经被广泛用于基因研究。介绍了 ????? ???? 的原理和反应影响因素? 并概述了其在分离和筛 选植物差异表达基因研究中的应用。 关键词 ????? ???? 差异表达基因 对不同细胞或者同类细胞在不同的生 理 状 态 、不 一般也集中在蛋白的编码区或者附近? 可最大限度的 同的发育阶段的基因表达状况进行分析 ? 可以为研究 提供基因编码区的 信 息 。????? ???? 所 需 的 实 验 仪 生命活动的过程提供十分重要的信息? 人们已经把基 器设备也比较简单? 已经成为目前筛选差异表达基因 因 表 达 差 异 的 研 究 拓 展 到 了 生 命 科 学 的 各 个 领 域 之 最有效的方法。 中。现阶段基因组学研究已经进入后期的功能基因组 ? ????? ???? 技术原理 学 ? ?????????? ????????? 的 研 究 阶 段 ? 对 基 因 在 特 定 时 ????? ???? 的 基 本 原 理 是 从 总 ??? 中 纯 化 出 期 转 录 水 平 上 的 表 达 丰 度 及 差 异 表 达 等 情 况 进 行 研 ???? 作为模板? 通过逆转录酶反转录合成 ???? 第 ? 究? 由此分析基因的表达方式及作用已经形成了功能 链?加入 ??? 酶 ?? 该酶是 ??? 的内切酶? 切割 ????? 基 因 组 学 的 重 要 方 面—— 转 录 组 学 ? ???????????????? 。 ????杂交体系中的 ????? 造成 切 口 和 缺 口 。 这 些 目 前 已 有 多 种 可 在 转 录 水 平 对 差 异 表 达 基 因 筛 选 分 ???片 段 就 作 为 ???? 第 ? 链 的 引 物 ? 在 大 肠 杆 菌 析的方法。最早发展起来的差别筛选技术和扣除杂交 ??? 聚合酶 ? 的作用下合成第 ? 链? 再用连接酶将缺 方 法 由 于 灵 敏 度 底 、过 程 繁 琐 、工 作 量 大 已 经 被 逐 渐 口封闭。得到双链 ???? 后用识别序列为 ? 个碱基和 淘汰。????? 等在 ???? 年建立的 ???? 差异显示反转 ?个碱 基 的 ? 种 限 制 性 内 切 酶 进 行 切 割 。 其 中 识 别 ? 录 ??? 技 术 ? ???????????? ??????? ??????? ????????????? ? 个碱基的为稀有切点酶? ???? ??????? ? 识别 ? 个碱基的 ???? ????? ???? 得到广泛应用? 但也遇到许多问题。 为常见切点酶? ????????