0A8蛋白适配体的筛选和结构分析.PDFVIP

北 京 大 学 学 报 （ 医 学 版 ） ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＰＥＫＩＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＨＥＡＬＴＨ ＳＣＩＥＮＣＥＳ）　Ｖｏｌ．４４　Ｎｏ．１　Ｆｅｂ．２０１２ ·１１· ·论著· 人重组 Ｓ１００Ａ８蛋白适配体的筛选和结构分析 彭　磊，张　欣，孟焕新 △ （北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科，北京　１０００８１） ［摘　要］目的：筛选人重组 Ｓ１００Ａ８蛋白特异性的适配体。方法：采用配体指数级富集系统进化（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｅｖｏｌｕ ｔｉｏｎｏｆｌｉｇａｎｄｂｙｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ，ＳＥＬＥＸ）技术，以人重组 Ｓ１００Ａ８蛋白为靶蛋白，以微孔板为筛选介质，从体外 合成的随机单链 ＤＮＡ文库中筛选其适配体。利用生物素链霉亲和素辣根过氧化物酶系统检测每轮单链 ＤＮＡ文 库与靶蛋白的亲和力直至亲和力的上升趋于饱和，将最后一轮筛选产物克隆测序，并进行生物信息学分析。结果： 经过 １１轮筛选，单链 ＤＮＡ文库与人重组 Ｓ１００Ａ８蛋白的亲和力趋向稳定，将第 １１轮筛选产物克隆测序，对获得的 ３０个适配体进行分析。一级结构分析显示 ３０个适配体并无共同的保守序列，但有 ３对适配体序列完全一致。二 级结构预测分析表明，茎环和口袋结构为主要的结构形式，提示其可能是适配体与人重组 Ｓ１００Ａ８蛋白特异性结合 的基础。根据茎环和口袋的相对比例可将 ３０个适配体分为 ４组，其中第 １组中 ３５号适配体与人重组 Ｓ１００Ａ８蛋白 亲和力最高。结论：获得了与人重组 Ｓ１００Ａ８蛋白特异性结合的适配体群，为后续适配体的应用研究以及 Ｓ１００Ａ８ 蛋白功能的研究奠定了基础。 ［关键词］钙粒蛋白 Ａ；ＳＥＬＥＸ适体技术；适体，核苷 ［中图分类号］Ｒ３??９．８　　［文献标志码］Ａ　　［文章编号］１６７１１６７Ｘ（２０１２）０１００１１０６ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１１６７Ｘ．２０１２．０１．００３ ＳｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅａｐｔａｍｅｒｓａｇａｉｎｓｔｈｕｍａｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＳ１００Ａ８ ｐｒｏｔｅｉｎ ＰＥＮＧＬｅｉ，ＺＨＡＮＧＸｉｎ，ＭＥＮＧＨｕａｎｘｉｎ△ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｈｏｏｌａｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｔａｉｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｔｈｅｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡ （ｓｓＤＮＡ）ａｐｔａｍｅｒｓｏｆｈｕ ｍａｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＳ１００Ａ８ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｌｉｇａｎｄｓｂｙｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ（ＳＥＬＥＸ）ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｓｓＤＮＡｒａｎｄｏｍ ｌｉｂｒａｒｙｗａｓｓｕｂｊｅｃｔｅｄｔｏ１１ｒｏｕｎｄｓｏｆｓｅｌｅｃｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔ ｈｕｍａｎｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＳ１００Ａ８ｐｒｏｔｅｉｎ．ＵｓｉｎｇａｂｉｏｔｉｎｓｔｒｅｐａｖｉｄｉｎＨＲＰｄｅｔｅｃｔｉｎｇｓｙｓｔｅｍ，ｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｃａ ｐａｃｉｔｙｏｆｓｓＤＮＡ ｔｏｔａｒｇｅｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍ ｅａｃｈｒｏｕｎｄｗａｓｍｏｎｉｔｏｒｅｄ，ｕｎｔｉｌｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｌｅｖｅｌｒｅａｃｈｅｄａ ｓａｔｕｒａｔｉｏｎｓｔａｔｅ．ＴｈｅｎｔｈｅｓｓＤＮＡｆｒｏｍｔｈｅｌａｓｔｃｙｃｌｅｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄ，ａｎｄｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅ ｆｕｒｔｈｅｒａｎａｌｙｚｅｄｂｙｐｒｏｇｒａｍｓｏｆｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ１１ｃｙｃｌｅｓｏｆｓｅｌｅｃｔ