蛋白质颗粒.ppt

在生物制剂中蛋白质微粒检测问题的发展——目前状态;摘要：;这是公认的研究方法在亚微米颗粒（＜1um）和低微米（1~10um）范围内，可以为了解颗粒的形成机制提供重要的线索。最近几年颗粒更全面的表征新技术的发展显著增加。在过去的五年中，由于受学术的文章，评论，和各种论坛热烈讨论的影响，增加了在这一领域的研究意识。本文概述了提供互补的表征数据涵盖更广颗粒尺寸范围的新兴的检测技术。它也讨论了它们在生物治疗药物发展方面的优点和局限性。 ;引言：;3、低聚物的形成发生通过共价键或非共价结合，聚集是能够导致大型颗粒和小型聚集体的主要途径。 4、微粒通常涉及大尺寸的种类在几十微米到亚毫米和毫米尺寸范围内并且通过人的眼睛分辨：可见的（100um）或显微镜可见的（10um）。然而，在亚微米级和低微米（1~10um）大小区域探索能够提供与颗粒形成机制有关的重要的数据。通过该领域的许多研究人员指出，生物制剂颗粒也可能来自外部资源，当临床和商业用途的药在严格控制的环境中制造时，外源性颗粒的发生会减少。;5、除了非低聚物，聚集体也可以由天然的单体低聚物形成，单体保持他们的二级和三级结构，了解内源的单体形成的低聚物和外源配合物是否有同样的安全风险是重要的。然而，基于尺寸的探究技术很难探索蛋白质结构的不同。本文主要讨论基于尺寸的检测技术，但应该指出的是，聚集体和颗粒的体外综合表征应该包括生化/分析，蛋白质的二级三级结构，和生物活性的测定。 ;6、蛋白质化学，蛋白质折叠，和生物制剂的制造在过去几十年的研究中取得了重大的进展。尽管有了这些进步，但是对于聚集体和颗粒的形成和预防途径的了解相对较少。文章强调的主要问题是用显微镜观察或在亚微米尺寸范围内定量的测定颗粒。也描述了技术改革的重大意义对于提高检测和表征技术能够帮助找到预防策略。 ;正文（六大部分）; 三、颗粒表征实验 1、动态图像分析 2、激光衍射分析 3、动态光衍射 4、拉曼/红外光谱成像 5、荧光显微镜 6、库尔特计数器 7、流式细胞仪 8、悬浮微谐振器 9、纳米粒子跟踪分析 10、TEM、SEM、AFM 四、颗粒形成机制 五、不良事件的关注 六、结论 ;一、尺寸和数量的连续统一性;其他的检测物如光散射和荧光可以增加检测的灵敏度，但无法实现可靠的定量分析。考虑到当前尺寸范围和质量水平检测的现状和差距，有人可能问是否有可能制定一个分析SEC系统能够检测1纳米到100微米连续的种类和从皮克到微克量连续检测单体和聚集体。;只可惜，现今没有这样的技术可以覆盖广泛的尺寸和质量。目前的做法归结为（a）、对于生物候选制品的风险品估基于观察到的临床开发的趋势。（b）、基于以上的风险评估选择合适的正交分析和生物物理方法。（c）、在分析的过程中收集数据在颗粒制剂形成的环境中建立一个全面的分子轮廓 ;二、颗粒计数分析;;三、颗粒表征实验;;;;;四、颗粒的形成机制; 化学和物理途径引发的蛋白质变性、错误折叠、部分展开、自缔合、表面吸附并形成共价键。认为暴露的蛋白疏水区域易引生聚合。此外，外源的微量蛋白质结构易提供成核位点。然而，使用常规的检测技术在原有的种类中检测外源物质非常具有挑战性。由于蛋白质配方的初始状态有较高的异质性。因此，控制成核种类变得更具有挑战???。 ;; 上图显示了一个参与微粒形成的可能的途径。包括：（a）局部未折叠的小分子物质、经疏松连接、紧密连接、形成小聚集体。（b）、核或其他预先存在的聚集体通过结合额外的单体生长。（c）、聚集体的生长通过聚集体-聚集体合并形成更大的可溶性聚集体。（d）、通过相分离的生长形成不溶性微粒。; 表面吸附种类或者通过与大体积种类接触或平衡也是形成颗粒制剂的途径。新兴技术像石英晶体微天平技术能够检测到被吸附的蛋白质层的结构的变化。 最后，与初级包装滤出物的相互作用可以引发聚合事件。;五、不良事件的关注;因此，大部分讨论通常围绕聚集体和颗粒的数量可能认为是安全的，我们也应该注意到聚集体或颗粒的类型的重要性，不是所有的聚集体都是相同的组成。临床前研究经常使用非代表性的数量和类型的聚集体或颗粒来诱导免疫反应。临床前研究目前不能预测颗粒的临床相关的免疫原性潜能。;六、结论;谢谢