多肽溶解指南.PDFVIP

多肽溶解指南 合适的溶解方法是多肽实验成功的重要因素。不合适的溶解会造成多肽的损失和实验的失败；然而，寻找理想的溶 解方法有时相当有挑战性。 您可以通过本指南中的步骤来选择最佳溶解方法，建议在溶解之前进行小试：通常先用蒸馏水或无菌水进行小试， 长度小于五个氨基酸的寡肽尤其如此。对于其他的特殊多肽，需要根据多肽的序列优化溶解条件。 溶解小试指南： 1. 将多肽序列中的每个酸性氨基酸包括天冬氨酸Asp（D），谷氨酸Glu（E）和C端的羧基-COOH赋值为-1；每个碱 性氨基酸包括精氨酸Arg（R）,赖氨酸Lys（K），组氨酸His（H）和N端的氨基-NH2赋值为+1；中性氨基酸为0。以 此为基础计算整条多肽的值，得分为正的称为碱性多肽，得分为负的称为酸性多肽，得分为零的称为中性多肽。 2. 如果是碱性多肽，先尝试用水溶解；如果不能溶解，尝试使用10% - 30%的醋酸；如果多肽还是不溶，尝试使用纯 醋酸和三氟乙酸TFA(50 μl)来溶解，然后将多肽溶液稀释到需要的浓度。 3. 如果是酸性多肽，先尝试用水溶解；如果用水不能溶解，尝试使用13%氨水（v/v）来溶解，并将多肽溶液稀释至 需要的浓度。如果多肽序列中包含半胱氨酸Cys（C），不能使用碱性溶液进行溶解。请尝试下面的方法。 4. 中性多肽通常用有机溶剂来溶解。首先，尝试使用乙腈（acetonitrile），或甲醇（methanol）或异丙醇（isopropanol） 进行溶解；对于疏水性非常强的多肽，先用少量的二甲基亚砜（DMSO）溶解，并用水稀释到需要的浓度；如果多肽 序列中含有半胱氨酸Cys（C），使用二甲基甲酰胺（DMF）或N-甲基吡咯烷酮 (NMP)进行溶解。对于容易聚集的多 肽，先加6M的胍盐酸（guanidine?HCl）或8M的尿素（Urea）来溶解，然后稀释到需要的浓度。 说明： 1. 为了方便储存及后续使用，建议将多肽溶解至浓度为1-2 mg/ml左右。 2. 普通多肽冻干粉可在-20度保存一年以上，对于已溶解的多肽，建议分装后储存于-20℃；如多肽序列中含有甲硫氨 酸Met（M），半胱氨酸Cys（C）或酪氨酸Tyr（Y），建议保存于无氧环境防止氧化。 附氨基酸列表： 种别 氨基酸 特点 中性氨基酸 甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、甲硫氨 这类氨基酸分子中只含有一个氨基 酸、苏氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、天门 和一个羧基 冬酰胺和谷氨酰胺 酸性氨基酸 谷氨酸、天门冬氨酸 这类氨基酸分子中含有一个氨基和 二个羧基 碱性氨基酸 赖氨酸、精氨酸、组氨酸 这类氨基酸的分子中含二氨基一羧 基；组氨酸具有氮环，呈弱碱性，也