红色亚栖热菌TPSTPP海藻糖合成途径中相关基因的.PDFVIP

生物工程学报 Chin J Biotech 2009, March 25; 25(3): 399-405 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ? 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 环境生物技术 红色亚栖热菌 TPS/TPP 海藻糖合成途径中相关基因的 克隆、表达及功能鉴定 朱玥明*, 唐亦辰*, 徐恒毅, 张娟, 魏东盛, 邢来君, 李明春 南开大学微生物学系 分子微生物学与技术教育部重点实验室, 天津 300071 摘 要: 通过构建红色亚栖热菌(Meiothermus ruber CBS-01)的基因组 DNA 文库, 克隆得到该嗜热菌海藻糖合成途径中 的磷酸海藻糖合成酶(TPS)和磷酸海藻糖磷酸酯酶(TPP)基因。以 pET21a 为表达载体, 将磷酸海藻糖合成酶和磷酸海藻 糖磷酸酯酶在大肠杆菌中进行表达并纯化, 利用薄层层析的方法验证了这两个酶的活性。同时, 本研究检测了红色亚栖 热菌在各种环境压力下细胞内含物成分的变化情况, 发现在高渗环境压力的诱导下, 该菌会在胞内积累大量的 6-磷酸 海藻糖, 而并非海藻糖, 这为进一步研究 TPS/TPP 和 TreS 途径在细胞体内的作用奠定了基础。 关键词: 红色亚栖热菌, 海藻糖, 海藻糖合成途径, 磷酸海藻糖合成酶(TPS), 磷酸海藻糖磷酸酯酶(TPP) Cloning, expression and functional analysis of the genes in TPS/TPP trehalose synthetic pathway of Meiothermus ruber Yueming Zhu*, Yichen Tang*, Hengyi Xu, Juan Zhang, Dongsheng Wei, Laijun Xing, and Mingchun Li Key Laboratory of Molecular Microbiology and Technology, Ministry of Education, Department of Microbiology, Nankai University, Tianjin 300071, China Abstract: By constructing the genomic DNA library of Meiothermus ruber CBS-01, the genes of trehalose phosphate synthase (TPS) and trehalose phosphate phosphatase (TPP) involved in trehalose synthesis were cloned. The genes were cloned into the plasmid pET21a, and expressed in Escherichia coli Rosetta gami (DE3). The activities of these two purified enzymes were confirme