实验五微生物的培养与分离技术-崑山电子历程.doc

環境微生物實驗 濾膜過濾法 (MF試驗法) 組長: 蔡傑舟 4980N020 組員: 李俊澄 4980N052 陳凱傑 4980N075 黃瑋晟 4980N031 指導老師:曹俊文 一、目的: 熟知濾膜法檢測之原理及判斷方法。 二、原理 與冗長的多管發酵法實驗過程比較，以濾膜法測定大腸菌類顯得簡單多。主要原因是將水樣經由抽氣幫浦真空抽氣，使其通過孔徑0.45±0.02μm、直徑為47mm之無菌濾膜，大腸桿菌類因無法濾過而留置於濾膜上。接著將以過濾的濾膜置於吸滿乳糖培養液或 Laury1 tryptose培養液之飽和吸收墊上，在攝氏35±0.5℃恆溫下培養1.5~2小時，接著取出濾膜移至E-Endoagar培養基或M-Endo培養液之飽和吸收墊上，攝氏35±0.5℃恆溫下培養22~24小時。培養過程中，大腸桿菌類會分解乳糖，產生氣體和醛類，醛類會與培養基（液）中的鹼性洋紅染料結合，在光線反射下，呈現綠色金屬光澤的菌落，數據計算大腸桿菌類的數???。所有缺乏金屬光澤的菌落，均判定為非大腸桿菌群。 通常濾膜上總菌數在200 以下，且大腸菌數20~30 個時最適宜計數，若總菌數超過200 個時，可將水樣進行稀釋後再進行實驗；令檢驗濁度較高或已知有大腸菌類的水樣時，則可利用較小體積的水樣來進行過濾。 適用範圍:本方法適用於地面水體、地下水體、廢水、污水及海域水質及水源水質水樣中大腸桿菌群之檢測。 三、實驗材料及儀器 1.塑膠培養皿 2.無菌濾膜3.玻璃吸管 4.吸球 5.稱藥紙 6.稱藥勺 7.鑷子 8.培養液 9.錐形瓶 10.燒杯 11.酒精 12. M-Endo agar 13.崑山湖水樣 儀器: 1.電子天平 2.電磁加熱攪拌器 3.恆溫培養箱 4.過濾抽氣裝置 四、實驗步驟 1.熟知濾膜法檢測之原理及判斷方法。 2.使用之培養基為M-Endo agar配置方法為1000ml加入51g M-Endo agar及20ml 95%酒精，現僅需要30ml水，因此 M-Endo agar 51/1000=X/30 95%酒精20/1000=Y/30。 3.放入磁石，放入電磁加熱攪拌器上加熱，蓋子不得鎖緊，外圍以紙箱圍住作為隔離。 4.隨時注意加熱情況，一有沸騰現象，要立即將瓶子由加熱器上移除，記得戴上隔熱手套進行。 5.到入空的小培養皿中，每個約4~5ml共六個，等待培養基凝固。 6.紀錄水樣來源。 7.以連續10倍稀釋，由原液取出11ml加入另一個100ml的培養液混合均勻，再取11ml加入另一個100ml培養液，依此推斷置10-5倍，因此水樣有6個濃度，各100ml，分別為原液、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5倍。 8.取0.45um孔徑之濾膜置於真空抽氣幫浦上，將水樣過濾。 9.過濾完後，將濾膜取出平鋪於凝固的M-Endo agar培養基上，標示清楚。 10.隔天看結果(一般200個菌數才算數)並計算原液中應有之菌數。 五、結果與討論 原液10^-110^-210^-310^-410^-50個1個0個0個0個0個公式：CFU/100ml=[(所選取出大腸桿菌群菌落數)*100/(所有選取之過濾水樣之體積)] 10^-1: [(1*100)/100]*10=0.001 原液 菌數無 10^-1 菌數1 10^-2 菌數無 10^-3 菌數無 10^-4 菌數無 10^-5 菌數無 1. 比較同一樣品以濾膜法、多管發酵法兩種實驗法方所記錄整理出來的數據，並參照法規(參考附錄D)所訂定之表準，樣品是否超過標準及受到大腸桿菌之污染?請進行合理解釋和推論。 我們兩次的水樣因氣候關係有些變化，所以沒辦法比較。 所採的水樣是崑山湖，崑山湖一直都有在做保養和維護，如果有汙染的事件發生，學校也會迅速的處理解決。 2. 試述濾膜法與多管發酵法之間之異同及優缺點。 濾膜法與多管發酵法之優缺點比較: 優點: 1. 短時間可獲得結果 2.可增加水樣靈敏度較高具代表性 3.培養基配置簡單 4.水樣不需特別處理 5.再現性高可直接計數 6.經費較節省 缺點: 1.水中濁度太高不適合使用 2.若有毒物質會吸附或濃縮於濾膜上，不適合使用 3.易受環境污染影響數據 3. 試述多管發酵法與濾膜法中所用的LST、BGLB、EMB培養皿、M-Endo agar