家蚕Argonaute2的表达分析及其结合RNA的初步研究.pdfVIP

浙????????大学学报 ?自然科学版?，第 ??卷，第 ?期 ，????年 ??月? ???????????????????????—?????????????????????????????????? ???．??，??．?，???．????? 文章编号 ：????—????????????—????—??? 家蚕 ??????????的表 达分 析 及 其? 结 合 ????的初 步 研 究? 张 玉? ，洪叶挺?一，盛 清?．?，陈 健???，于 威?．?一，王 丹?一，? 吴祥甫? ，张耀洲?．?，聂作明?·? ??．浙江理 工大学，?．生命科 学学院；?．浙江省家蚕 生物反 应器和 生物 医药重点实验 室，杭 州 ???????? 摘 要 ：从 家蚕 ???? 文库 中扩增 到 家蚕 ??????基 因完整 的 ???序 列 ，通 过 ?????????软件 分 析 获得? ??????的抗原表住 区?命 名为 ??????，构建含 ?????的表达载体，转化 大肠杆 菌诱 导表达 ，融合蛋 白经镍 柱亲和? 层析 纯化后 免疫新西兰大白兔制备 多克隆抗体 ，?????和 ????????????????检测抗血 清的效价 可达到 ?：??????以? 上，抗体特异性较好 。表达谱 分析结果显示 ，??????蛋 白在 家蚕 卵期、蛹期 、蛾 期和五龄 幼 虫期 均表达 ，但在 蛹期? 表 达量要偏 低。而在 五龄 幼虫各组织 中 ??????蛋 白的表 达 差异较 明显 ，??????蛋 白在 头部 和表 皮 中大量表? 达，丝腺 、马氏管和脂肪 中也有少量表达 ，而在血淋 巴、气管和 中肠 中未检 测到该 蛋 白的表 达。结合 ???????表达? 谱 分析 结果，进一步利 用其抗体通过免疫共沉淀方法从 ??????蛋 白表达量 高的 家蚕 头部和表 皮 中分 离出 ???—? ???蛋 白及 结 合 的 ???，并 逆转 录成 ????。以 家蚕 ????? 潜在 的靶 基 因 ?????，???????????，?????，? ????，?????作为检测基 因，荧光 定量 ???分析获得 的 ??????结合 ???，和 对照组 ??? 相比 ，?????，??? ?????一????，?????，????，?? 基 因在 ??????结合 ??? 中的含 量分 别富集 了 ?．??、????、?．?、?．??、?．??? 倍 。?????? 位点分析表 明 ，?????和 ?????存在 多个 ????? 结合位 点 ，极 有 可能是 ????? 的靶 基 因。 目前? 还 没有有效 的家蚕 ?????靶基 因 高通量鉴 定方法 ，本 实验 为 家蚕 ?????靶 基 因的 高通 量 筛选提提 供 了可 靠地? 实 验 途 径 。? 关键词 ：???????；表达谱分析