家蚕新基因Bmbzj的表达、抗体制备及亚细胞定位.pdfVIP

浙江理工大学学报 ，第 ??卷 ，第 ?期 ，????年 ?月? ???????????????????????—???????????????? ???．??，??．?，???．????? 文 章 编 号 ：????—?????????????????—??? 家 蚕 新 基 因 ?????的 表达 、抗 体 制备 及 亚 细胞 定 位? 高 珍?，卜远虹?，金邦泽?，于 威?，刘 悦。，陈 健?，张耀洲? ??．浙江理 工大学生物化 学研 究所 杭 州，??????；?．浙江经贸职业技 术学院应 用工程 系 杭 州，???????? 摘 要 ：在 自建的 家蚕 ?????库 中发现 了一条新基 因序列 ，???????登 录号为 ????????。该基 因是一个 同? 源性很低 的基 因，未发现保守结构域 ，将其命 名为 ?舶 ?。?????基 因全 长 ??????，由 ?????的 ??端非翻译 区序 列? ???????、??????的开放读码框 ?????和 ?????的 ??端非翻译 区序列???????组成。生物信 息学分析结果表 明蛋 白? ?????可能存在跨 膜区和信号肽 。将该基 因插入到栽体 ?????????中 ，构建 了该基 因编码的 重组质粒 ?????????一? ?????，转化大肠杆菌 ???????后 ，????诱 导表 达 了该 融合蛋 白，并利用亲和层 析的方 法纯化 该重组蛋 白，免 疫新西? 兰兔制备 多克隆抗体 。亚细胞 定位 实验 结果表 明该蛋 白只存在 于细胞质 中。? 关键 词 ：家蚕 ；?????基 因 ；原核表达 ；纯化 ；亚细胞定位? 中 图分 类号 ：???? 文 献标 识码 ：?? ? 引? 言? ? 材料和方法? ?．? 实验材料? 因家蚕在基础生命体系、物质代谢 、能量代谢和? 家蚕培养细胞系 ???、?．????????、???????菌? 遗传方式上与人类有很 多相似性之处，且遗传资源? 株 、表达载体 ?????????由本实验室保存 ；雄性新? 丰富 、遗传背景清楚 ，其在克隆人类疾病控 制新基? 西兰兔?约 ?????购 自杭州师范大学实验动物中心 。? 因、研究疾病机理和开发新药等方面将发挥重大作? 琼脂糖 ??????????、电泳级 ???、??固体、???????、? 用 。目前国际上对于家蚕作为模式生物的研究竞争? 溶菌酶、丙烯 酰胺购 自 ??????????????????? 公司；? 激烈 。 自 ????年我 国率先完成家蚕基 因组 “框架? ???酶及相应 ???反应有关试剂购 自上海博亚????—? 图”后 ，目前在家蚕功能基因组研究和应用研究中已? ????生物技术有限公司；限制性 内切酶??????、??加工? 发现了 ??????个家蚕 基因 ，其 中大部 分是新 发现? 购 自 ???????公 司