课件5：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;1.尿素的利用;3.常见的分解尿素的微生物;1.实例：DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（93 ℃）的DNA聚合酶。; 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等； 方法：⑴抑制大多数微生物不能生长；⑵造成有利于该菌生长的环境。 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。; 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。;1.显微镜直接计数：;2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落??由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。;每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。;计数法;实验操作; 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。;制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备牛肉膏蛋白胨培养基;应在火焰旁称取土壤10g。 在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在火焰旁进行; 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？; 结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。;取0.1ml菌悬液;高浓度→低浓度，换枪头;涂布分离; 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 ;按浓度捆成一摞;菌落