白蛋白测定和线性范围试验.pptVIP

血清总蛋白（TP）测定与线性范围试验邹佳峻;一、双缩脲法测定血清总蛋白（TP）二、线性范围试验;1.实验目的： 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理、方法 熟悉722分光光度计的使用 了解TP测定的临床意义;+; OH- 蛋白质分子中的肽键 + 铜离子 紫红色复合物 （-CO-NH-） Cu2+ 紫色复合物在540nm波长有特定的吸收峰，其颜色的深浅（吸光度）与蛋白质的浓度在一定范围内成正比。 此反应和2个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与Cu2+作用生成紫红色复合物的反应相似，故称双缩脲反应。; 3.实验材料：;4.实验方法：;另取5支试管，按下表操作：;5.实验结果：;参考值： 60~82g/L; 6.总蛋白测定的临床意义：;（2）血清总蛋白浓度降低见于： a.蛋白质合成障碍（如肝严重受损）； b.蛋白质丢失增加（如严重烧伤、肾病综合征）； c.营养不良或消耗增加（如低蛋白饮食、严重结核病、甲亢）； d.血液稀释。;配对样本是指同一样本进行两次测试所获得的两组数据，或对两个完全相同的样本在不同条件下进行测试所得的两组数据。 SPSS13.0操作： 1、录入数据； 2、选择菜单：Analyze Compare Means Paried-Sample T Test 3、生成统计结果，查看P“sig.(2-tailde)”（值（P值0.05，可以认为两种方法的结果差别无显著性差异；P0.05，有显著性差异。） ;7.注意事项：;8.思考题：;二、线性范围试验;在比色分析中，在符合Lambert-Beer定律的条件下，有色溶液的吸光度与被测物质浓度成正比。 以标准物质浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标，可在普通方格纸上绘出一条直线，即剂量反应曲线或校正曲线。;在此情况下，待测物浓度与吸光度的比值为一常数，直线上任何一点的斜率tanθ都相等，即tanθ=A1/C1=A2/C2=A3/C3=……An/Cn=K此处K即为校正常数。;在实际工作中并不存在理想的反应曲线，当被测物浓度过高、仪器处于非理想状态时，都可导致对Lambert-Beer定律的偏离，出现正偏离和负偏离现象。;因此，新建立的分析方法，其线性范围尚未确定时，为较准确地测出该方法符合Lambert-Beer定律的浓度范围，我们需要进行线性范围的测定。;线性范围的确定： 要求能覆盖临床上的参考值和常见疾病的医学决定水平，以减少标本稀释重测的机会。;3.实验材料：;取试管31支，除空白管外，1~10号管各做3个平行管，一共有10个浓度。按表三加样：;5.实验结果：;6.注意事项：;（4）同一浓度应采用三管平行操作，初步判断测出的吸光度值，若相差超过0.100，应去掉其中的异常数值后再算平均值。 （5）标准溶液和样品溶液的蛋白质浓度均应超过10mg/mL。 ;7.数据处理与分析：;（一）线性回归;在两个具有相关关系的变量的一组数据（X与Y）间，通过散点图我们可观察出所有数据点都分布在一条直线附近，这样的直线可以画出许多条，而我们希望其中的一条能最好地反映X与Y之间的关系，即我们要找出一条直线，使这条直线“最贴近”已知的数据点。;线性回归——用直线方程表达X（自变量）和Y（因变量）之间的数量关系。 ?：是y（实测值）的预测值，表示当x取值xi=（1，2，……，n）时，y相应的预测值为yi。 ?=a+bx称为Y对X的回归直线方程，相应的直线称为回归直线。;a：是回归直线在Y轴上的截距，即X=0时Y的预测值。 b：是回归直线的斜率，又称为回归系数。表示自变量X对因变量Y影响大小的参数，即当X改变一个单位时，Y的预测值平均改变|b|个单位。 要确定回归直线方程，只要确定截距a与回归系数b即可。;回归直线的求法 　 最小二乘法： 各实测点到直线的纵向距离的平方和最小。;直线相关——如果两个随机变量中，一个变量由小到大变化时，另一个变量也相应地由小到大(或由大到小)地变化，并且测得两个变量组成的坐标点在直角坐标系中呈直线趋势，就称这两个变量存在直线相关关系。 可用相关系数r表示。;相关系数r——是说明有直线关系的两个变量间相关关系的密切程度和相关方向的统计指标。 相关系数没有单位，其值-1 ≤r≤ 1。 |r|越大，两变量的关系越密切。;当两变量呈同向变化时，0＜r＜1，为正相关； r=1为完全正相关。;当两变量呈反向变化时，-1＜r＜0，为负相关； r=-1为完全负相关。;r=0为零相关，表示无直线相关关系 。 ;决定系数r2：反映了回归平方和占总平方和的比例，其越接近于1，回归直线拟和的效果越好。 拟合度越大，自变量X对因