抗体（研究生）.pptVIP

抗体; 1890年Behring和北里柴三郎 发现白喉抗毒素,建立了血清疗法,开创了抗体制药。 1937年Tiselius用电泳法将 血清蛋白分离为白蛋白、α、β、γ球蛋白，并证明抗体活性主要 存在于γ球蛋白组分。 ; 血清中同抗体结构类似的球蛋白， 统称为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。所以Ig是化学结构的概念，而抗体是生物学功能的概念。;Ab的基本结构;;免疫球蛋白的血清型;;抗体攻击病毒;凝集细菌;抗体 是对其抗原有极强专一性 的 魔弹 或 巡弋飞弹;● 至2000年底，在美国药品市场上生物技术药物有76种，其中抗体药物有15种。 ● 2003年治疗用单抗销售总额已超过52亿美元。 ● 2006年预计50-60个治疗性单抗上市。 ● 2010年预计单抗销售额200亿美元。 ● 美国已占全球单抗市场90%—一支独秀。 ● 完全人源化单抗现有多个处于临床前阶段;抗体药物销售趋势图;整体水平抗体生成技术;各种抗原分子具有很多抗原决定簇，因此，免疫动物所产生的抗体实为多种抗体的混合物。 天然抗原----免疫动物------免疫血清 A.?抗毒素血清： 白喉，破伤风 B.??胎盘球蛋白（丙球） C.??抗菌免疫血清 D.??抗病毒免疫血清 用这种传统方法制备抗体效率低、产量有限，且动物抗体注入人体可产生严重的过敏反应。此外，要把这些不同的抗体分开也极困难。 ;传统抗血清; 1975年Kohler和Milstein首先利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体。 单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的发展。 ;只针对某一特定抗原决定基，纯度高的抗体。 一个B细胞只能产生针对一个抗原决定基的抗体。;;;1;单抗的应用： 临床检测：抗细胞表面分子的单抗 抑制器官移植排斥 治疗自身免疫疾病：抗细胞因子的单抗（IL-1、8,TNF） 生物导弹——单抗靶向制剂：;生物导弹： 药物与单抗直接藕联：细胞毒素-肿瘤细胞单抗 药物通过小分子与单抗连接：最普遍 小分子有：戊二醛等。 药物通过大分子与单抗连接：大分子：葡聚糖等。可连接许多药物分子，使药物浓度高; 基因工程抗体;;鼠源性单抗----???------人的抗鼠反应 人-鼠嵌合型抗体：用鼠源抗体的抗原结合部分代替人源性抗体的抗原结合部分，尽可能减少抗体的异源性，而保留其抗原结合活性。 包括： 嵌合抗体：抗体的可变区为鼠源性，而恒定区为人源性 改型抗体（人源化）：只有CDR区为鼠源性的。 第一个人源化单抗：rituxan，为抗CD20，在非何杰金淋巴瘤的治疗中已经取得了良好的疗效。 ;1 嵌合抗体(Chimeric Antibodies);嵌合抗体; 克隆鼠单抗的可变区基因，可从基因组文库中分离，也可用PCR技术分离。 人抗体恒定区可根据需要选择，不同的恒定区会带给嵌合抗体不同功能。为避免人抗体的恒定区产生不需要的副作用，可通过点突变来修饰调整其效应。;2 改型抗体; 经过CDR移植，抗体的免疫原性极低，而其抗原结合能力保持不变，结合半抗原及全抗原(如细胞表面受体、病毒等)的改形抗体都已有报道，到现在已有数百种人源化抗体。（美国正式上市的11种治疗性单抗中多数是改型抗体） ; 人源化抗体的构建可用全合成法或定点突变法。 全合成法是以人抗体序列为骨架，以鼠抗体的CDR置换人抗体的CDR，将整个可变区序列的两条链分解成若干片段，并使相邻的片段具有彼此互补的粘性末端。合成所有DNA片段，每组片段分别退火，然后逐组连接成完整的可变区基因，插入质粒中，进一步即可用于构建和表达改形抗体。 ; 定点突变法是将人的可变区基因克隆，根据鼠抗体的CDR 序列合成几种突变引物，用定点突变的方法将人的可变区基因的CDR序列变为鼠抗体的CDR序列，然后表达出改型抗体。;; 小分子抗体包括Fab、Fv或ScFv、单域抗体及最小识别单位等几种。 小分子抗体有很多优点: 可以用细菌发酵生产，成本低; 分子小，穿透力强; 不含Fc，没有Fc带来的效应; 在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒排出; 易于与毒素或酶基因连接，便于直接获得免疫毒素或酶标抗体等。 ;; 由完整的Fab组成，大小为完整分子的1/3。 把Fab与细菌的前导肽相连，在前导肽的作用下Fab进入质周腔，装配折叠后，它具有结合抗原的活性。; Fv、ScFv的大小约为全分子的1/6。; Fv由VH与VL构成，由于其结合是非共价结合，故Fv不稳定。 在VH与VL之间加上一段连接肽，把VH与VL