实验4水中细菌总数测定及土壤微生物分离.pptVIP

实验三 水中细菌总数的测定和土壤微生物的分离;一 实验目的;二.实验原理：;本实验以普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，采用平板菌落计数技术来分别测定自来水和河水中的细菌总数。 ;三、实验操作;3. 将河水水样分别稀释成10-1、10-2、10-3三个连续稀释浓度（注意：在稀释前后一定要充分混匀）、自来水样不稀释。 注意：河水样的稀释，取1个灭菌空试管，加入9mL灭菌水。用取过灭菌水的移液管取1mL河水样，放入试管中，振荡试管混合均匀。 ;4.涂布平板法： 1）加热已经配制好的固体培养基（肉膏蛋白胨琼脂培养基），使固体培养基溶化。 2）倒制平板：每个空平皿中倒约20mL的培养基，放置桌面待其凝固。 3）用移液管吸取0.1mL水样，滴于平板中；将玻璃涂布棒于酒精灯的外焰上加热，杀死表面微生物，然后耐心待其冷却，然后用涂布棒将水滴均匀的涂满整个平板表面，尽量将水涂干。 5. 倒置于37℃培养箱中培养24h。;;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;6.菌落计数： 1）挑取无片状菌苔生长的平板作为计数平板，若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布很均匀时，可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数。 2）选择平均菌落数在30～300之间的平板来计算该水样的菌落总数。如果所有的平板的菌落总数都不在30—300范围之内，则取最靠近30—300的平板进行计数 3） 如果有两个稀释浓度的总菌落数落在了30—300范围之内，则先计算两个浓度下每ml水体中细菌总数，如果两个数值的比值大于2则取小的浓度，如若小于2则取两值的平均值。;（二）土壤微生物的分离、培养;三、实验操作 1、倒平板 将营养琼脂培养基、高氏1号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基，加热溶化，待冷至55-60℃时，马丁培养基中加链霉素（终浓度为30μg/ml），混匀后倒平板。;2、 制备土壤稀释液 称取土壤10g，放入盛有90ml无菌水中，剧烈震荡20min，充分混合。用无菌吸管吸取1ml土壤悬液加入9ml无菌水中，混匀，以此类推，制备成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6不同稀释度的土壤溶液。 ;3、涂平板 将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-4，10-5，10-6种稀释度，再用无菌吸管分别吸取10-4，10-5，10-6种稀释度的土壤稀释液0.1ml，用无菌涂布棒涂布均匀后，静置5-10min。（若平板数量不足， 减少10-6稀释度的平板）;4、培养 将高氏1号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于28 ℃恒温培养箱中培养3-5d，营养琼脂培养基平板倒置于37 ℃恒温培养箱中培养2-3d。;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;;思考题： 为什么马丁培养基中要加入链霉素？如果用牛肉膏蛋白胨培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为应如何做？