果蝇唾液腺染色体的分离及观察.docVIP

山东大学实验报告 2013年 03 月 22 日 姓 名 班 级 同组人　 科 目 遗传学实验 题 目 果蝇唾腺染色体标本制备和观察 组 别　 第  PAGE 6 页 共  NUMPAGES 6 页 山东大学遗传学实验报告 一、研究背景 1.发现 1881年，意大利的细胞学家巴尔比尼（Balbiani)在双翅目昆虫摇蚊幼虫的唾腺细胞间期核中发现了一种巨大的染色体，由于存在于唾腺细胞中，所以又称为唾腺染色体。1933年，美国学者贝恩特（Painter）等又在果蝇核其它双翅目昆虫的幼虫唾腺细胞间期核中发现了巨大染色体。这种染色体宽约5μm，长400μm，相当于普通染色体的100-150倍，因而又称为巨大染色体。 2.原因 (1)染色体螺旋化程度不高。 (2)果蝇幼虫的唾腺细胞在发育过程中，细胞核内的DNA多次复制，但细胞、细胞核不分裂，复制后的染色单体DNA也不分开，形成了多线染色体。 (3)同源染色体相互靠拢在一起呈现一种联会状态，使其比一般的体细胞染色体粗大。 3.基本概念 核内有丝分裂：不伴随核分裂和细胞分裂的染色体分裂。 核内复制；不伴随细胞内核分裂的染色体复制现象。 体联会：唾腺细胞中的染色体复制后，所有同源染色体一直处于紧密配对的前期状态，如同减数分裂的联会，这种现象称为体联会。 4.果蝇的染色体组成 由于在唾腺细胞中8条染色体之间以着丝粒相互连结在一起形成染色盘或异染中心和同源染色体之间的假联会，经碱性染料染色后，可以观察到一个染色较深的染色盘和以染色盘为中心向外辐射出的5条染色体臂。在这些染色体臂上可以看到染色深浅不同，被称为明带和暗带的横纹，这些横纹的位置、宽窄、数目都具有物种的特异性，不同物种，不同染色体的不同部位形态和位置是固定的，因此根据染色体各条臂带纹特征和各条臂端部带纹的特征能准确识别各条染色体。在染色体臂上还可看到某些带纹通过染色体的界旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼环，其富含转录出来的RNA ，因此不着色，是基因活动的区域。在个体发育的不同阶段，疏松区或巴尔比尼环在染??体上出现的部位不同，因此可以研究基因的表达，开展各种染色体变异的研究等等。 果蝇共有4对染色体。其中一对为性染色体（XY或XX），XX染色体为顶端着丝粒染色体，呈杆状，Y染色体为“J”形；第二对、第三对染色体均为中央着丝粒染色体，呈“V”形；第四对染色体短小，为顶端着丝粒染色体，呈点状，附在染色盘边缘。由于唾腺染色体的假联会，X染色体的一端在异染中心上，另一端游离；而第二对、第三对染色体着丝粒在中央，可以从异染中心呈“V”字形向外伸展出四条臂（2L、2R、3L、3R），Y染色体着丝粒附近的异染色质参与了染色中心的形成，所以理想的片子，不管雌雄果蝇的唾腺细胞在显微镜下均可见五条长臂（X、2L、2R、3L、3R)和一条短臂（第四条染色体臂不易观察）。雄果蝇唾腺细胞中的X染色体臂比雌果蝇的稍细。在染色体臂上可观察到许多明暗相间的带。 (1)果蝇染色体有102个区，每个区又有A—F六个亚区，每个亚区又有1,2,3……等亚亚区。 (2)疏松区有许多灯刷状物质（灯刷染色体） (3)唾腺染色体的末端有不同的特征，可以借此来鉴别各条染色体。 5.特点 (1)巨大； (2)体联会现象决定了染色体只有半数； (3)各个染色体中异染色质多的着丝粒部分相互靠拢形成染色中心； (4)横纹有深浅、数目、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列，具有种的特异性。 (5)多线染色体（与中期高度螺旋的染色体相区别）若有缺失、易位、倒位、重复等现象，很容易在唾腺染色体上识别出来。 实验目的1. 练习解剖果蝇幼虫的技术2. 掌握果蝇唾液腺染色体的制片方法3. 了解果蝇唾液腺染色体的形态结构特点4. 根据带纹的形态和排列识别不同的染色体，进一步研究鉴别果蝇染色体结构变异的方法 实验材料 1. 材料：黑腹果蝇的三龄幼虫。2. 器具：双筒体视解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸等。3. 药品：改良苯酚品红溶液、生理盐水、1mol/L盐酸、蒸馏水。 实验步骤 选取幼虫在贴近培养基的表面寻找肥大的向管壁上爬的三龄幼虫 分离唾腺： 将幼虫放在含有一滴生理盐水的洁净载玻片上。在解剖镜下观察：幼虫头部有黑色的口沟，尾端有一对黄色的后气门。双手各持一枚解剖针，用左手