补肾健脾方促卵泡发育及排卵的实验研究.docVIP

PAGE  PAGE 7 补肾健脾方促卵泡发育及排卵的实验研究 王希浩1，李兴华2 （1.河南省中医药研究院，河南 郑州 450008；2.河南中医学院，2007级研究生，河南 郑州 450008） 摘要 目的：探讨补肾健脾方促进卵泡发育及排卵的作用机理。方法：以未成年雌性大鼠为研究对象，对其阴道脱落细胞、子宫卵巢形态学、血清前列腺素等指标进行观察比较。结果：补肾健脾方能促进卵泡发育及排卵，促进子宫内膜向分泌期转变，并能调节血清前列腺素。结论：补肾健脾方促卵泡发育及排卵的机制可能与调节H-P-O,调节前列腺素有关。通过促排卵，促进子宫内膜向分泌期转变，从而达到止血的目的。 关键词：补肾健脾方；促卵泡发育及排卵；青春期功血；实验研究 近年来随着求学压力的增加，青春期功血的发病率逐年上升，约占功血的4％，其中无排卵及黄体形成者占55%一75%[1] ，目前是???科的疑难病症之一。导师以补肾健脾，固冲止血为治则，拟补肾健脾方治疗青春期功血取得了良好的临床疗效。本实验旨在探讨其促卵泡发育及排卵的作用机理。 1 材料与方法 1.1 实验动物　雌性未成年Wistar大鼠66只, 25~28日龄, 体重60～80 g, 由河南省实验动物中心提供，合格证号：scxk(豫)2005-0001。 1.2 实验药物　补肾健脾方由党参、炒白术、荆芥炭、生山药、川断、阿胶等组成。按原方剂量20倍取材制剂，所得制剂含生药浓度约1.5g/ml，宫血停颗粒：10g/袋，哈药集团中药三厂生产，批号：080351。已烯雌酚片：0.5mg/片，合肥久联制药有限公司生产，批号均按照临床剂量的6.7倍制成，置于4℃冰箱备用。由河南省中医药研究院制剂室提供。 1.3 主要仪器及试剂 生物显微镜：OLYMPUS859310 JAPAN。血球分类计数器：由福建罗源医械二厂生产。智能放免r测量仪:由上海原子核研究所日环仪器厂生产。大容量低速冷冻离心机：由上海中科生物医学有限公司生产。血栓烷B2、6-酮-前列腺素F1α放免试剂盒：均由解放军总医院科技开发中心放免研究所提供，批号：200902274。 1.4 动物分组及给药方法　选取健康未成年雌性大鼠66只, 随机分为补肾健脾方高、中、低剂量组、宫血停组、已烯雌酚组和空白对照组, 每组13只, 分笼喂养, 每日定时灌胃, 给药1 次。中药高、中、低剂量组给药剂量分别为30g/kg、15g/kg、7.5g/kg（以生药量计），分别相当于临床剂量的6.7倍、3.35倍、1.68倍。阳性对照组分别给予宫血停、已烯雌酚, 均按临床剂量的6.7倍制成，用药剂量分别为8g/kg、0.067mg/kg，各组用药体积均为20ml/k g , 空白对照组给予等量生理盐水。均连续给药22d。 1.5 检测指标与方法 1.5.1 阴道脱落细胞变化 于给药的第17天起，每日上午进行阴道脱落细胞涂片1次，连续1个性周期（5天）。方法：将蘸过生理盐水的棉签插入大鼠阴道约3－4mm，轻轻旋转一周取出，涂于载玻片上，晾干，用95％无水乙醇固定约3－5分钟，HE染色，用200倍生物显微镜观察。通过阴道脱落细胞检测来判断大鼠动情周期变化。 1.5.2 子宫卵巢组织形态学观察 动物处死同时摘除双侧卵巢、子宫。将分离的卵巢子宫固定于10％多聚甲醛液中,然后脱水，石蜡包埋，切片，常规HE染色，观察比较子宫卵巢组织形态学变化（包括各级卵泡数目、黄体数目、主卵泡直径及卵泡成熟总数）。卵泡直径以切片中最大卵泡直径计；卵泡成熟总数以每只大鼠单侧卵巢切片中黄体数与成熟卵泡数相加之和计。 1.5.3 血清6-酮-PGF1a和TXB2测定 于给药22天后，以 10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉取血2-3mL，离心分离血清。用放射免疫分析法测定6-酮-PGF1a和TXB2，严格按照试剂盒说明书操作。 3 统计分析 所有数据均采用Spss for windows(ver 13.0)软件进行统计处理，组间两两比较用t检验，结果以均数（）±标准差(S)表示。 结果 4.1 阴道脱落细胞检查 空白对照组大鼠阴道涂片表现混乱 ,多数持续在动情间期，无周期性变化;补肾健脾方组大鼠则部分已表现出周期性，但尚不稳定。空白对照组涂片可见大量底、中层细胞，表层细胞较少，角化细胞所占比例小；补肾健脾方组、宫血停组涂片可见少量底层细胞，中、表层细胞多见，角化细胞所占比例较大；乙烯雌酚组涂片可见大量中表层细胞，角化细胞所占比例大。 4.2 各组大鼠子宫卵巢组织形态学变化 4.2.1 子宫组织形态学 肉眼观察: 己烯雌酚组子宫轻度充血，明显增粗。余组无明显差别。 镜下观察：空白对照组子宫壁较薄，粘膜较薄，固有层结缔组织较致密，腺体较少，腺腔小，上皮细