高效液相色谱法检测酱油中的苯甲酸钠.docVIP

PAGE  PAGE 7 高效液相色谱法检测酱油中的苯甲酸钠 1．原理 酱油样品经酸化后，用乙醚提取苯甲酸，定容过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间定性和峰面积定量。 2．试剂 甲醇:分析纯，经滤膜（HF 0.5?）过滤； 无水乙醚：分析纯； 无水乙醇：分析纯； 6N盐酸：取36~38%的盐酸500ml，定容至1000ml； 4%氯化钠溶液：称取40.0g氯化钠,定容至1000ml； 0.02M乙酸铵溶液：1.54g乙酸铵定容至1000ml,溶解后经滤膜(HA 0.45?)过滤； 苯甲酸标准储备液：称取苯甲酸0.1000g加2%碳酸氢钠溶液1ml,搅拌溶解,加水定容到100ml，苯甲酸浓度为1mg/ml； 苯甲酸标准使用液：取苯甲酸标准储备液10ml，放入100ml容量瓶中，定容至刻度，苯甲酸浓度为0.1mg/ml。 3．高效液相色谱条件 Spectra-Physics 高效液相色谱仪； 色谱柱：Spherisorb ODS1 Ф4.6mm?200mm； 检测器：紫外检测器，波长230nm，灵敏度0.2 AUFS； 流动相：甲醇:0.02M乙酸铵（5：95）； 流速：1ml/min； 进样量：10?l； 允许差：相对误差≤10%。 4．操作方法： 4.1样品预处理： 称取均匀的酱油样品5.0g放入125ml的分液漏斗中，加 入6N盐酸1ml酸化，用15﹑10ml无水乙醚萃取两次，合并乙醚放入125ml分液漏斗中，用4%的氯化钠溶液约10ml分别洗涤两次，将洗涤后的乙醚移入80ml蒸发皿中，温水浴挥干，分别用10ml无水乙醇洗涤蒸发皿两次，放入100ml容量瓶中，再用蒸馏水洗涤蒸发皿两次，并入上容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，用0.45?（HA）滤膜过滤，供高效液相色谱测定用。 4.2测定操作： 开机预热30min并对流动相进行脱气操作，待流动相流速恒定及检测器稳定后，用25?l微量进样器吸取供试液进样，绘图积分，得供试样品的吸收峰面积，并进样测定苯甲酸标准吸收峰的面积，根据计算公式算出样品中苯甲酸的含量。 4.3计算公式： Ai ? Co 1  ci= Ci  Ci= = —————— ? n ? —— Ao m 式中Ci——样品中苯甲酸的含量; Ai——测定样品的吸收峰面积; Co——配制的标准苯甲酸溶液的浓度; Ao——标准苯甲酸溶液的吸收峰面积; n ——测定样品的稀释倍数; m——测定样品的质量。 5. 实验数据： 5.1实验操作过程的重现性测试： 取均匀的金标生抽王样品，分装成五份，每份5.0g，按上述的样品预处理方法分别进行萃取操作（每次萃取操作尽可能完全一致），得五个待测样品，分别进样检测，用外标峰法确定苯甲酸的含量。五次萃取操作数据比较如下表： 表1．实验操作重现性数据表 样品编号12345苯甲酸标准(0.1mg/ml)样品质量(g) 5.005.005.005.005.00╱吸 收A1129.2110.5111.098.3117.3 490.7峰 面 A2101.4112.191.1117.0积(104)ā115.3111.3101.198.3117.2样品中苯甲酸含量（g/kg）0.4700.4540.4120.4010.478╱样品中苯甲酸平均含量(g/kg)0.443╱相对误差(%)6.12.4-7.0-9.56.1╱ 结论： 从表中可知，连续五次同样的萃取操作所得的结果都较为接近，相对误差在允许范围10%以内，完全符合标准要求，因此，从实验操作过程的重现性来分析，用该操作方法测定苯甲酸的含量是稳定可行且符合标准要求的。 5.2高效液相色谱仪进样的重复性(稳定性)测试： 取0.1mg/ml苯甲酸标准使用液，用25?l微量进样器进高效液相色谱仪,绘图积分,测出苯甲酸的吸收峰面积,以同样的操作手法连续进样6次,将各次的吸收峰面积数据比较如下表： 表