细胞表面分子的检测和分析.pptVIP

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2017-04-20 发布于四川
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细胞表面分子的检测和分析

本次实验课流程; 医学结构生物学研究中心柳卫凰;流式在细胞表面分子检测中的应用;标本来源;; 标本制备;标本制备;四、贴壁细胞单细胞悬液的制备（1）将培养细胞用0.04％EDTA或0.25％胰酶消化3～7分钟，至光镜下见到贴壁细胞变圆还没有漂浮为止，弃消化液，加PBS；（2）用吸管将细胞从瓶壁上轻轻吹打下来，移入离心管中；（3）离心，1000r/min，5min；（4）加PBS洗两遍；（5）PBS重悬，将细胞吹打均匀；（6）荧光标记。;标记方法;对照设置;同型对照（Isotype Control）;双色标记荧光补偿;荧光补偿对照;注意事项;样本的采集;样本的储存;样本的染色; 溶血，即裂解红细胞。它是流式细胞术分析白细胞的先决条件。溶血不好，白细胞群不能很好分开，溶血好坏直接影响检测结果。因此，必须对溶血过程进行严格控制。 ;;结语;常用的荧光染料;参考书籍;实验：人外周血T淋巴细胞亚群的检测与分析;淋巴细胞;T淋巴细胞(CD3+);活化T淋巴细胞;1.取新鲜抗凝血100ul，置于FCM测量管中； 2.直接标记法：加入带荧光标记抗人的单克隆抗体 10ul，充分混匀，4℃闭光孵育20～30min; 3.加入溶血剂A液600ul, 轻轻振荡15s, 加入溶血剂B液260ul, 轻轻振荡15s，加入溶血剂C液100ul, 振荡10s,上机检测。 ACK溶血剂:加入2mlACK溶血剂，充分混匀，反应5min, 1000r/min离心5min，去上清；重复一遍，用PBS洗涤1遍，收集细胞上机检测。;ABC溶血剂配方;ACK溶血剂配方; 实验分组;荧光补偿;“A门”内CD3/CD4的表达;“A门”位置变化引起的改变;“A门”位置变化引起的改变;;小鼠脾细胞CD3+/CD4+的表达;思考题、实验报告;