真核基因组DNA分离纯化.pptVIP

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2017-04-24 发布于四川
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真核基因组DNA分离纯化.ppt

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真核基因组DNA的分离纯化 ;分离纯化核酸总的原则：;分离核酸应注意以下几点：;核酸提取的主要步骤：;一、外周血白细胞DNA提取（NaI法）;【实验原理】;【实验材料】 1、高速离心机。 2、各种所需试剂;【实验方法】 1．取新鲜抗凝血100 μl置EP管中，离心10 000 r/min×1 min。 2．弃上清，加ddH2O 200 μl，摇匀20 s。 3．加6 mol/L NaI 200 μl，缓慢倒置摇匀20 s。 4．于管内加氯仿/异戊醇（24:1）400 μl，摇匀20 s，离心12 000 r/min×12 min。 5．吸取上层水相360 μl置一新Ep管中，加纯异丙醇200 μl，摇匀20 s。 6．室温放置15 min，离心14 000 r/min×12 min。 7．小心弃去上清，再加37%异丙醇1 ml（勿摇动），离心14 000 r/min×12 min。 8．小心弃去异丙醇，晾干。 9．加50 μl TE缓冲液溶解DNA，以琼脂糖凝胶电泳鉴定或-20℃保存。;【注意事项】; 4．0.54～1倍的异丙醇可选择性沉淀DNA和大分子rRNA和mRNA，tRNA及多糖不产生沉淀。一般不需在低温条件下放置。其缺点是易使盐类与DNA共沉淀；在DNA沉淀中的异丙醇难以挥发除去，所以常规需要70%的乙醇漂洗DNA沉淀物。;