细胞的冻存及复苏材料.pptVIP

细胞冻存与复苏;细胞的冻存和复苏;1.细胞冻存;2.细胞复苏;为使细胞复苏时存活率最高 最佳的冻存条件： 尽可能地降低细胞内的晶体形成，减小细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的损伤。 A) 缓慢冷冻 B) 用亲水的低温保护剂排除水分 C)在尽可能低的温度保存细胞 D)快速复苏 ; 要获得好的冻存与复苏效果，必须了解如下几个问题：冷冻速率、复苏速率、冷冻保护剂，冷冻保存温度。 ;冷冻速率：降温的速度，直接关系到冷冻效果，对一种细胞进行冷冻保存之前，首先需要测定其最适冷冻速率，以保证获得最高的冷冻存活率。 ;细胞冻存与复苏的关键因素;复苏速率：在细胞复苏时温度升高的速度。复温速率不当也会降低冻存细胞存活率。一般来说，复温速度越快越好，速度过慢，细胞内往往重新形成较大冰晶而造成细胞损伤。复温时造成的细胞损伤非常快，往往在极短的时间内发生。;冷冻保护剂：可以保护细胞免受冷冻损伤的物质分为渗透性和非渗透性两类。 不同的冷冻保护剂有不同的优、缺点。目前一般多联合使用两种以上冷冻保护剂组成保护液。;冷冻保存温度：能长期保存细胞的超低温度，在此温度下，细胞生化反应极其缓慢甚至停止，但经过长期保存，在复苏后仍能保持正常的结构和功能。 液氮温度（-196℃）是 目前最佳的冷冻保存温度。;冷冻速率：慢冻 复苏速率：快融 冷冻保护剂：渗透性和非渗透性 冷冻保存温度：－196 ℃（液氮）;冷冻保存方法;冷冻保存方法;细胞复苏方法