显微技术在生物科学的应用讲解.pptVIP

显微技术在生物科学上的应用;一、电子显微技术在生物医学中的应用 ;1、电镜对病毒性疾病的诊断;核衣壳在细胞内复制组装的部位、病毒体的形态和大小以及螺旋对称核衣壳的直径等,再结合病毒的核酸和蛋白分子生物学特性,可以对致病病毒进行鉴定和分类。电镜负染技术是一种快速简便的操作程序,也是病毒性致病因子电镜诊断常用方法,在新病毒的发现中作出了重要贡献。免疫电镜的应用更提高了病毒快速诊断的敏感性和特异性。 ;2、电镜对肿瘤的诊断;免疫组织化学方法虽然对肿瘤的诊断发挥了很大作用,但由于肿瘤的多向分化及部分市售免疫组化试剂存在明显的交叉反应性,所以应用免疫组化染色诊断肿瘤有一定的局限性。而电镜技术的应用为肿瘤的诊断提供了一条新的途径。 ;3、电镜对非肿瘤性疾病的诊断;二、荧光显微分析技术在植物细胞学研究中的应用;人们才越来越清楚地了解到细胞器动力学中起重要作用的细胞结构是细胞骨架。与此同时,人们利用一些特异性荧光探针来研究细胞骨架在不同细胞生活状态下的分布,也取得了很大进展。 李岩等 采用免疫荧光定 位,在LSCM下观察,发现南瓜的茎细胞微管骨架排列主要有三种方式:在一些薄壁细胞内,微管骨架是网络状排列,其中微管常常与液泡膜、核膜及质膜相连;而在多数伸长的细胞中, 微管骨架往往是与细胞的纵轴成一定角度,并彼此平行排列;少数伸长细胞内,微管骨架形成束状,沿细胞纵轴排列.;2、细胞生理状态的研究;结果表明,花粉萌发初期细胞质内游离Ca2+ 呈极性分布,萌发沟附近的Ca2+ 浓度明显高于其他部位,萌发孔附近最高,花粉细胞核中较低。在该条件下将Fluo3/AM导入拟 南芥叶细胞,利用激光共聚焦显微技术检测了胞内Ca2+ 荧光强度的分布研究表明茉莉酸处理能够诱导胞内游离Ca浓度的升高。使用铝敏荧光试剂标记大豆根尖细胞的铝离子,利用激光扫描共聚焦显微镜检测,发现铝对根尖细胞的分裂有抑制作用。 ;3、细胞自发荧光的荧光强度测定 ;三、原子力显微镜技术及其在细胞生物学中的应用?; 对于原子力显微镜成像而言, 样品在基底表面的固定是一个至关重要的问题, 对于细胞样品来说尤其如此. 如何将细胞样品固定得比较牢固又保持细胞的原始状态是许多研究者关心的重点. 最初的报道中细胞一般都是经过自然干燥固定然后在空气介质中进行成像研究. 自然干燥固定法是将一定量的细胞样品滴在基底上,然后在空气中自然干燥, 干燥后形成一层平整连续的膜. 这种固定方法非常简单, 但是由于细胞在干燥过程中会脱水, 因此对细胞形态等会有一定的影响. 后来, 如何在溶液状态下固定活细胞成为许多研究者工作的重点.; 有研究者利用静电相互作用或共价交联等方法来固定细胞样品. Bolshako小组将基底表面进行聚赖氨酸修饰来固定细胞, 在生理条件下细胞一般荷负电, 而聚赖 氨酸荷正电,因此可以利用聚赖氨酸与细胞之间的静电相互作用固定细胞. 这种细胞固定方法操作简单且重复性好, 是目前为止用得最多的一种方法. 不过, 由于聚赖氨酸与细胞壁存在一定相互作用, 因而对细胞结构还是存在一定的影响.;2、细胞成像?? ;3、力检测?; 力与距离的关系曲线显示孢子发芽过程中表面结构的变化与复杂的分子反应有关: 静止孢子与AFM原子力显微镜针尖之间没有黏附力, 而发芽孢子与针尖间则有很强的黏附力. 他们还结合原子力显微镜和力谱对上述孢子表面大分子拉伸情况进行了定量测定, 得到的结果与以前文献报道的单个右旋糖苷和直链淀粉多糖的弹性变形量一致 .;谢谢观赏