粗糙脉孢霉分子遗传分析.docVIP

真菌类的遗传分析 ————四分子分析与作图 一 粗糙脉孢霉的性质与生活史 （一）粗糙脉孢霉的性质 粗糙脉孢霉 ( Neurosporocrassa ) 属于真菌中的子囊菌纲，是低等的真核生物。每一菌丝细胞中含有几十个细胞核。是遗传分析好材料: 1子囊孢子是单倍体，其表型直接反应其基因型。 2 一次只分析一个减数分裂的产物。 3体积小，易培养，繁殖快，一次杂交就能产生大量的后代，便于获得正确的统计学结果。 4能进行有性生殖，其染色体的结构和功能类似于高等动植物。 5 更加重要的是，子囊孢子在子囊中的线性排列顺序与减数分裂中期染色体在赤道板两侧的排列顺序相同，这就是粗糙脉孢霉成为了遗传分析的好材料。 （二）粗糙链孢霉的生活史 粗糙链孢霉有有性生殖和无性生殖。 二　顺序四分子与遗传分析 （一）顺序四分子 (ordedtetrad) 粗糙脉霉菌减数分裂的四个产物保留在一起，称为四分子。 但是，在分裂的过程中子囊的外形比较狭窄，以至分裂的纺锤体不能重叠，只能纵立于它的长轴中，这样所有分裂后的核――８个子囊孢子都是从上到下排列成行，所以，脉孢菌减数 分裂所产生的四分子是属于顺序四分子(ordedtetrad)。 可推知：第一对子囊孢子来自一条染色单体，第二对孢子则是来自这条染色单体的姊妹染色单体; 第三和第四对子囊孢子是来自前一条染色体同源染色体的姊妹染色单体。 这种顺序四分子在遗传分析上有很多优越性: (1). 可以把着丝粒作为一个座位(locus)，计算基因与着丝粒的重组率，即着丝粒作图。 (2). 子囊中子囊孢子的对称性，证明减数分裂是一个交互过程，而非单向过程。 (3).可以检验染色单体的交换有否染色单体干涉现象，还可利用它来进行基因转变(gene conversion)的研究。 (4).证明双交换不仅可以包括4线中的两线, 而且可以包括3线或4线双交换。 （二）着丝粒作图与遗传分析 利用四分子分析法，测定基因与着粒间的距离称为着丝粒作图。 着丝粒作图是基于这样的事实： 减数分裂中在同源染色体的一对非姊妹染色单体的着丝粒和某杂合基因座间有没有发生交换，和其产物四分子中的等位基因在排列方式上是不同的。 可分为两种： 利用四分子分析，测定基因与着丝粒间的距离，即根据子囊孢子基因型的排列顺序，计算基因与着丝粒的重组率，确定基因与着丝粒之间的距离和排列顺序。 一对基因的遗传分析 材料 有两种不同接合型的脉孢菌菌株： ? 一种是能合成赖氨酸(lysine)的野生型菌株(记作lys+，或+)，该菌株成熟的子囊孢子呈黑色。 ? 另一种是赖氨酸缺陷型(记作lys — 或—)，这种菌株的子囊孢子成熟较迟，呈灰色。 序号子囊类型子囊数分裂类型 将这两种菌株杂交 杂种子囊减数分裂的产物根据黑色孢子和灰色孢子的赖氨酸缺陷型(lys-) × 野生型(lys+)，排列次序可有6种子囊型，为方便起见只写出其4个孢子对( spore pairs)，其计数的结果： 序号子囊类型子囊数分裂类型 序号 子囊类型 子囊数 分列类型 1 + + — — 105 M1 非交换型 2 — — + + 129 3 + — + — 9 M2 交换型 4 — + — + 5 5 + — — + 10 6 — + — + 16 将表3-7中所观察到的各类子囊数代入上式可得： lys+基因与着丝粒间的图距是7.3cM 两个基因的连锁图形 利用顺序四分子分析，同样可以进行两个基因的连锁作图 nic（nicotinic acid）为烟酸依赖型 n ade（adenine）为腺嘌呤依赖型 a 两对基因的杂交实验，可产生(6×6)36种不同的子囊型，归纳为7种基本的的子囊型 序号 1 2 3 4 5 6 7 子囊型 +a ++ ++ +a +a ++ ++ +a ++ +a na n+ na na n+ na n+ ++ +a ++ +a n+ na na n+ n+ na n+ 分离类型 MIMI MIMI MIMII MIIMI MIIMII MIIMII MIIMII 类别 PD NPD T T PD NPD T 数目 808 1 90 5 90 1 5 对子囊进行分类统计，不考虑孢子排列顺序，根据性状组合将四分子分为三种类型 PD: 亲二型（parental ditype)：孢子有2种基因型，且与亲代相同. NPD: 非亲二型（non-parental ditype)：孢子有2种基因型，且与亲代不同. 如果PD:NPD=1:1，则两个基因自由组合，否则连锁。 T: 四型（tetratype):孢子有4种基因型，2种与亲代相同, 2种与亲代不同. 首先判断n、a