大肠杆菌检测指导.ppt

* PPT模板下载：/moban/ 大肠杆菌 检测方法 2014070014 目录 概述 检测方法 检测原理 讨论与展望 Your text Your text Your text 概述 大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%，是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。大肠杆菌能合成维生素B和K，正常栖居条件下不会致病；若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在水和食品中检出，可认为是被粪便污染的指标。大肠菌群数常作为饮水、食物或药物的卫生学标准。大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示茵，因此大肠杆菌的检测技术显得十分重要，相应出现了大量的大肠杆菌的各种检测方法。我将介绍一些常用的大肠杆菌检测的传统方法以及最近出现的新的检测方法，为以后大肠杆菌检测提供一些参考。 传统检测方法 检测新技术 多管发酵法 滤膜法 平板计数法 气相色谱与液相色谱法 ATP生物发光技术 PCR检测技术 生物传感器检测技术 免疫磁珠技术IMS 基因芯片技术 自动化仪器 Your text Your text Your text 检测原理 多管发酵法是一种检测食品及水体中大肠杆菌的传统方法。这种方法是将样品接种于LST肉汤中在37℃±1℃的条件下培养24±2h，之后对产气样品进行复发酵；复发酵是将初发酵中产气样品接种于EC肉汤中，44.5±0.2℃条件下培养24±2h，若产气则进行平板分离培养。多管发酵法对试验条件要求不高，成本低，但是检测时间较长，容易受其他条件干扰，进而影响到测定结果的精确度。 Your text Your text Your text Your text 检测原理 滤膜法适用于水质监测，是首先于滤器内加入10mL无菌稀释水，接着将适量充分混匀的待检食品的水溶液加入滤器中，进行抽滤，快滤完前加少许无菌稀释水以冲洗滤器内壁，使水溶液内的细菌全部集中于滤膜上；用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在M-FC培养基上,滤膜截留细菌面向上，滤膜与培养基完全紧贴不能有气泡，将培养皿紧密盖好后，置于能准确恒温于44.5±0.5℃的恒温培养箱中,经24±2h培养，粪大肠菌群呈蓝色或蓝绿色,计数此类菌落数目。 Your text Your text Your text Your text 检测原理 平板计数法首先选取较适宜的连续稀释梯度样品匀液，将冷却至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注于平皿内，混匀并凝固后加入3~4mL的VRBA-MUG覆盖平板表层，36±1℃下培养18~24h，之后在紫外灯下计数。该方法是将样本做一定比例的稀释，其中的微生物被稀释后分散成单个细胞，然后在一定的条件下进行培养一直到生长成能用肉眼观察的菌落，最后通过样本数量和稀释度来计算出单位样本中的菌数。本方法适用于除贝类产品外的食品中大肠杆菌检测。 Your text Your text Your text Your text 检测原理 气相色谱法主要是将大肠杆菌经过一系列衍生化的前处理后，为接下来的分析研究提供尽可能多的化学组分。大肠杆菌的污染程度可以用顶空气相色谱法来分析，其原理是利用食品密封系统顶部的微生物代谢产物CO2对微生物进行分析。这种方法对食品质量安全检测有重大意义。与上述传统技术相比，此种方法具有检测速度快、灵敏度高的优点。高效液相色谱法（HPLC）主要是根据离子配对反相层析的原理来分析核酸。HPLC主要是针对DNA片段分离。长链DNA所携带的磷酸基团比较多，因此会有更多的TEAA与之相融合，其在柱内停留的时间增加。 Your text Your text Your text Your text 检测原理 ATP生物发光技术是近些年来发展较快的微生物快速检测方法。ATP是活细胞中最普遍的能量代谢产物，为细胞提供各种生理活动所需的能量，而且其在生物体内含量维持在一定的范围内。ATP含量检测的一种方法是荧光光度法，生物发光是活细胞在荧光素酶催化下发出的荧光。与传统检测方法相比，不同之处在于几分钟内便可获得检测结果，而且荧光光度计是便携式的，使用非常方便，适用于现场检测，这种技术可以用于检测微小的污染物水平以及食品加工设备及其表面的清洁程度的检测。 Your text Your text Your text Your text 检测原理 PCR检测技术是在1971年首先被Kleppe等提出，1985年才作为一种检测方法获得认可。PCR检测技术是一种聚合酶链反应，其采用变性—退火—延伸三个步骤使DNA基因能够在体外实现解旋解链，类似于一种体外增加、复制