氯霉素试剂盒检测方法.doc

酶标免疫分析定量检测氯霉素残留试剂盒。德国R-Biopharm公司制造(中文翻译件仅供参考,以试剂盒内附的英文原件为准.) 简介 RIDASCREEN Chloramphenicol（产品编号R1501） 竞争酶标免疫法定量测定牛奶，肉类及鸡蛋中的氯霉素残留。试剂盒中包括了所有检测用的试剂。该试剂盒有96个试验孔包括标准试验，如果进行定量分析，必须有微孔板酶标仪。 检测下限: 尿液中 50ppt 虾及鱼肉 50ppt 牛奶中： 150 ppt 肉类中: 100ppt 1. 用途 RIDASCREEN chloramphenicol竞争酶标免疫法定量测定牛奶，尿液，虾肉，鱼肉，肉类及鸡蛋中的氯霉素残留。 概要（略） 测定原理 测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有针对兔IgG（氯霉素抗体）的羊抗体。加入氯霉素抗体，氯霉素酶标记物，标准或样品溶液。游离氯霉素与氯霉素酶标记物竞争氯霉素抗体，同时氯霉素抗体与羊抗体连接。没有连接的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色。在450nm处测量（选择参比波长≥600nm）。吸光度值与样品中的氯霉素浓度成反比。 提供的试剂 每一个盒中的试剂足够进行96个测量（包括标准分析孔），盒中的材料如下： 1 X 96孔板（12条 X 8孔）包被有抗兔IgG的羊抗体 6 X 浓缩标准液, 300ul/瓶, 为氯霉素溶液 0ppt，500ppt, 1500ppt, 4500ppt, 13500ppt, 40500ppt 1 X 过氧化物酶标记的氯霉素浓缩液 …..……..红色帽 1 X 氯霉素抗体浓缩液…………………………..黑色帽 1 X 基质(7ml);含有过氧化尿素…….……….…..绿色帽 1 X 发色剂(7ml);四甲基联苯胺…….….…….….蓝色帽 1 X 反应停止液(14ml)1M硫酸....….……….…..黄色帽 1 X 缓冲液1(100ml)用于标准，酶标记物，抗体，样品 及缓冲液 2稀释用 1X 缓冲液 2（1ml），测定牛奶样品时的标准稀释用缓冲液 需要的材料但盒中不提供 设备 ----微孔板酶标仪(450nm) ----离心机 ----旋转蒸发器 ----振荡器 ----磁力搅拌器 ----刻度移液管 ----50ul, 100ul, 450ul微量加样器 试剂 ----醋酸乙酯 ----乙腈 ----正己烷（或正庚烷） ----异辛烷 ----三氯甲烷（氯仿） ----葡萄糖苷酸酶glucuronidase/arysulfatasesolution （Merck, Art.No.4114） ----Carrez I：0. 36M铁氰化钾（II）X 3 H2O ----CarrezII：1. 04 M 硫酸锌X7 H2O 筛选肉样品用试剂 PBS缓冲液：(0.55g NaH2PO4 X H2O; 2.85g Na2HPO4 X 2H2O +9g NaCl 加入蒸流水至1000ml）；pH7.2 6. 操作者应该注意之事项 ----标准液含有氯霉素，应特别小心 ----反应停止液为1M硫酸,避免接触皮肤 ----不要使用过了有效日期的试剂盒, 稀释或搀杂使用会引起灵 敏度的降低. ----不要交换使用不同批号的盒中试剂. 7. 储存条件 ----保存试剂盒于2-8oC.不要冷冻 ----无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下 ----将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂 一起重新密封. 8. 试剂变质的迹象 发色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之. 0标准的吸光度值小于0.6个单位 (A450nm0.6)时,表示试剂可能变质. 9. 样品处理 (样品应当在暗处及冷藏保存) 9.1 牛奶样 -----10oC离心10分钟 3500 g, 吸除上层的脂肪 ----5ml去除脂肪奶加入150ul Carrez I出现沉淀，短暂振荡，然 后加入150ul Carrez II混合。 ----15 oC离心10分钟 3500 g ----移取上层液 ----用buffer 1稀释液 以1：2稀释上层液（1份上层液+1份 buffer 1）， ---