霍乱实验室检测技术20110318.pptVIP

霍乱弧菌实验室检测技术 北京市海淀区 疾病预防控制中心 提纲 O1群霍乱弧菌的流行情况 1817年~1923年发生六次霍乱的世界大流行 均由O1群霍乱弧菌古典生物型引起 1820年古典生物型引起的霍乱首次传到我国 1961年开始了第七次霍乱的世界大流行 均由O1群霍乱弧菌埃尔托生物型引起（1905年发现） 1961年埃尔托生物型霍乱首次传到我国 O139群霍乱弧菌的流行情况 1992年印度马德拉斯发生O139霍乱并迅速传播 1993年6月我国新疆发现O139霍乱流行。 1994年我市发现O139霍乱疫情 霍乱的生物学性状 霍乱的生物学性状 霍乱的生物学性状 霍乱的生物学性状 霍乱的生物学性状 霍乱的生物学性状 霍乱的生物学性状 霍乱的生物学性状 样本的采集 检验操作程序 检验操作程序 霍乱弧菌在庆大培养基上菌落形态。(菌落呈现无色 、圆形半透明、湿润、扁平或稍突起、边缘整齐，由于亚碲酸钾的作用，菌落中央常呈灰色或灰黑色） 检验操作程序 检验操作程序 检验操作程序 检验操作程序 检验操作程序 检验操作程序 检验操作程序 检验操作程序 检验操作程序 检验操作程序 检验操作程序 药敏试验注意事项 每次药敏试验必须用ATCC 25922大肠杆菌做质控 使用的MH培养基不能太薄 使用的MH培养基PH值应为7.3 抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限 不可用过期的试剂和药敏纸片 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 荧光定量PCR方法鉴定 探针和引物 SO1F SO1R O1 probe SO139F SO139R O139 probe SCTXF SCTXR CT probe GACTCACCTTCGATTTCAGCAA GAATAACTCAAGGCGATGAAGTGAT FACGGGTAACGCACCACACTGGACTATGP GCGGTGTAGCGGGTTTTATTAG TGCATAATACTTTCGACCATGGA FAAACAGTCGACCGGCGATAAACGCTP TTTCATCGCAAGTATTACTCATCGA AAGAGCCGTGGATTCATCATG FAGCATTCCCACAACCCGGCGP Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 荧光定量PCR方法鉴定 模板的制备： 挑取数个菌落加入装有100μＬ去离子水的1.5mL 管中,混匀后100℃ 10分钟，12000转/分钟离心5分钟，取上清液作为模板。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 荧光定量PCR方法鉴定 反应体系的配制(20 μＬ体系) （Pemix Ex TaqTM TaKaRa 生物公司提供） 2 × PCR反应混合物： 10μＬ/份 上游引物（10μM）： 0.4μＬ/份 下游引物（10μM）： 0.4μＬ/份 探针（10μmol/Ｌ）： 0.4μＬ/份 模板DNA： 2μＬ/份 DDw： 6.8 μＬ/份 Total: 20 μＬ Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. * * Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Lt