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第15章 色谱分析法导论 15.1 内容提要 15.1.1 基本概念 分离分析法——利用样品中共存组分间的各种性能上的差异，先将它们分离然后进行分析测定的分析方法。 色谱分析法——利用样品中各待测组分间的吸附、分配、交换等性能上的差异，在两相（流动相和固定相）中先将它们分离，然后按一定顺序检测各组分及其含量的方法。 气相色谱——流动相是气体的色谱法称为气相色谱(GC)。其固定相是固体吸附剂的，称为气固色谱(GSC)；若固定相是涂在惰性载体(担体)上的液体，则称为气液色谱(GLC)。 液相色谱——流动相是液体的色谱法称为液相色谱(LC)。其固定相是固体吸附剂的，称为液固色谱(LSC)；若固定相为液体，则称为液液色谱(LLC)。 柱色谱(CC)——固定相装在柱管内的色谱法称为柱色谱。它可分为两类： 一类是固定相填充于玻璃或金属管内叫填充柱色谱；另一类是固定相附着或键合在管的内壁上，中心是空的，叫空心毛细管柱色谱或毛细管柱色谱。 纸色谱(PC)——固定相为滤纸的色谱法称为纸色谱。 　 薄层色谱(TLC)——固定相压成或涂成薄层的色谱法，叫薄层色谱。 吸附色谱——它是利用固体吸附剂(固定相)表面对各组分吸附能力强弱的不同进行分离的色谱法。 分配色谱——它是利用固定液对各组分的溶解能力(分配系数)不同进行分离分析的色谱法。 离子交换色谱法——利用离子交换剂(固定相)对各组分的亲和力不同进行分离分析的色谱法。 凝胶色谱——也叫空间排阻色谱，它是利用某些凝胶(固定相)对分子大小、形状不同的组分所产生的阻滞作用不同而进行分离分析的色谱法。 色谱图——组分在检测器上产生的信号强度对时间(t)所作的图，由于它记录了各组分流出色谱柱的情况，所以又叫色谱流出曲线。流出曲线的突起部分称为色谱峰。 基线——在正常实验操作条件下，没有组分流出，仅有流动相通过检测器时，检测器所产生的响应值。稳定的基线是一条直线，若基线下斜或上斜，称为漂移，基线的上下波动，称为噪音。 峰高h——从峰的最高点至峰底(峰的起点与终点之间的连接线)的距离。可以用纸的高度(mm)、电信号的大小(mV或mA)表示。 标准偏差σ——峰高0.607辈出的色谱峰宽度的一半。 峰底宽Y——色谱峰两个拐点处所作切线与基线相交点之间的距离。与σ的关系是：Y = 4σ 半峰宽Y 1/2——峰高1/2处色谱峰宽度。与标准偏差σ的关系为 　　 . 峰面积A——色谱峰与峰底之间的面积。它是色谱定量的依据。色谱峰的面积可由色谱仪中的微机处理器或积分仪求得，也可以采用以下方法计算求得。 对于对称色谱峰： 对于非对称色谱峰： 　　死时间tM——不能被固定相滞留的惰性组分从进样到出现峰最大值时所需的时间。若组分为空气，则用t0表示：若是甲烷，则用tM表示，单位为min. 保留时间tR——组分从进样到出现峰最大值时所需的时间。 调整保留时间tR——扣除死时间后的保留时间，体现了待测组分真 实地用于固定相溶解或吸附所需的时间。 或 　　死体积VM——不能被固定相滞留的(惰性)组分从进样到出现峰最大值时所消耗的流动相的体积。 (F0为柱后出口处流动相的体积流速)。 　　　　　VM =tM× F0 或 保留体积VR——组分从进样到出现峰最大值所需的流动相的体积。VR = tR × F0 调整保留体积VR——扣除死体积后的保留体积，是真实地将待测组分从固定相中携带出柱所需的流动相的体积。　　 or 　　相对保留值或——在相同操作条件下，组分2(或i)与参比组分1(或s)的调整保留值之比。 γ2.1＝ = 分配系数K——组分在两相之间达到分配平衡时，该组分在两相中的浓度之比是一个常数，这一常数称为分配系数，用K表示。 K= ＝ 分配比——溶质在两相中物质的量之比。又称容量因子、容量比、分配容量。 或 分离度R——为相邻两色谱峰保留值之差与两峰宽度平均值之比。 校正因子和相对校正因子——相同色谱条件下，某一组分i产生的色谱响应值——峰面积Ai或峰高hi与这一组分的质量mi成正比，即或，式中，(或)为组分i在该检测器上的响应斜率，也称为定量校正因子。它的物理含义是单位峰面积或峰高所代表的组分量。实际工作中是采用相对校正因子，即用标准物质的校正因子来校正其他物质的校正因子，于是。 15.1.2 基本内容 1. 色谱分析法的分离原理 当混合物随流动相流经色谱柱时，就会与柱中固定相发生作用(溶解、吸附等)，由于混合物中各组分物理化学性质和结构上的差异，与固定相发生作用的大小、强弱不同，在同一推动力作用下，各组分在固定相中的滞留时间不同，从而使混合物中各组分