烟草叶片蛋白质组双向电泳实验体系的建立.pdf

中国烟草科学 ChineseTobaccoScience 2012】2，33(6) 烟草叶片蛋白质组双向电泳实验体系的建立 王绍美，罗成刚，刘贯山，冯全福，苏振刚，陈雅琼，蒋彩虹 ，孙玉合 (烟草行业烟草遗传育种重点实验室，中国农业科学院烟草研究所，青岛 266101) 摘 要：选用干旱敏感型栽培烟草品种中烟 100旺长后期的叶片和感黑胫病栽培烟草品种小黄金 1025苗期的叶片作为实验 材料，总蛋 白质提取分别采用稍加改进的TCA／丙酮法和由蛋白质分级提取、酚抽提及丙酮洗涤相结合的方法。对中烟 100 旺长后期烟草叶片采用的总蛋白质TCA／丙酮提取方法进行了优化、对其使用的IPG胶条 pH范围做 了初步筛选，并在此研 究基础上，对采用第二种提取方法获得的小黄金 1025苗期烟草叶片总蛋白质样品进行了不同上样量对双向电泳结果影响的 比较实验。初步建立起适合烟草叶片蛋白质组研究的双向电泳实验体系。 关键词：烟草；叶片；蛋 白质组；双向电泳 中图分类号：$572．01 文章编号：1007—5119(2012)06—0054—07 DOI：10．39690．issn．1007．5119．2012．06．011 EstablishmentofTwo-dimensionalEleCtrOphOreslSProtocolforTobaccoLeaf Proteome WANGShaomei，LUOChenggang，LIUGuanshan，FENGQuanfu，SUZhengang，CHENYaqiong， JIANGCaihong，SUNYuhe ‘ (KeyLaboratoryofTobaccoGeneticsandBreeding，TobaccoResearchInstituteofCAAS，Qingdao266101，China) Abstract：The plantmatedalsused in these experimentswere theflourishing late tobacco leavesofZhongyan 100．a drought—sensitivevariety，andtheseedlingleavesofXiaohuangjin1025，avarietysusceptibleforthetobaccoblackshankpathogen． Tbtalproteinswereextractedbytrichloroaceticacid，acetoneprecipitationmehtod．respectively．andproteinfractionatedextraction combined withpheno1extractionandacetonewashing methodwithsomeminormodifications．A trichloroaceticacid ／acetone precipitationmethod，usedforproteinextractionfrom Zhongyan100leaves，wasoptimized．TheimmobilizedpH gradientstrips appliedtoZhongyan100totalproteinswasselectedpreliminarily．Onthebasisofthisstudy,wecomparedtheeffectsofdifferent proteinquantities，fromXiaohuangjin1025totalproteinsextractedbythesecondproteinextractionmehtod，on2-DEprofile．2-DE experimentprotoco1suitablefortobaccoleavesproteomestudywasestablishedpreliminari1v． Keywords：tobacco(NicotianatabacumL．)：leaf；proteome；two—dimensionalelectrophoresis 蛋 白质组学是后基因组时代功能基因组学研 的不同在两个方