烟草叶围细菌的分离及其对Alternaria+alternata的拮抗作用.pdf

烟草叶围细菌的分离及其对 Alternaria alternata的拮抗作用 张成省1，孔凡玉”，李多川!，王静1，王凤龙1 (1中国农业科学院烟草研究所，青岛，266101；!山东农业大学，泰安，271018) 强拮抗活性的9个菌株。离体叶片生防测定实验表明，9株细菌均能不同程度的减轻烟草赤星病 的发生。其中菌株Tpb88具有较强和稳定的拮抗作用，无菌滤液实验表明，叶围细菌Tpb88在一 定浓度范围内能有效抑制彳．alternata菌丝生长、孢子萌发和芽管伸长，且浓度越高，抑制能力越 强。本研究结果表明Tpb88对烟草赤星病菌的拮抗机制可能为抗菌物质的产生。 关键词：生物防治 叶围细菌 Alternariaalternata 烟草赤星病，病原物为Alternariaalternata，是烟叶成熟后期重要的叶部病害，在我国各 烟区均有发生，直接影响烟叶的产量和质量。长期以来，主要以利用抗病品种和化学防治为主。 但是理想的抗病品种很难获得，并容易丧失抗性。化学防治在病害防治中起到重要作用，但又 受到三个因素的限制：目前高效低毒的杀菌剂农药品种较少；环境条件对防治效果影响很大， 在环境条件适宜病原菌侵入和传播时，防治效果不令人满意；容易造成环境污染。生物防治对 J。 环境友好，在某些情况下具有良好的防治效果，并成为目前研究和开发的热点【l 叶围微生物(phyllospheremicrobe)指的是附生或寄生于植物叶部周围的微生物。植物叶围 分布着大量微生物细菌，它们与植物病原菌具有相同的生态位，在植物一微生物复杂的微生态关 系中发挥着重要作用¨1。其中有一些微生物可以通过拮抗、竞争、促生以及诱导植物抗性(HR) 等作用来抑制植物病害的发生发展p’引，具有潜在的开发和利用价值。作者从烟草叶围分离出对 烟草赤星病菌具有显著拮抗作用的两株拮抗细菌，并选择一株优良菌株Tpb88进行拮抗实验， 以明确其拮抗力及拮抗机理，为大田应用提供实验依据。 1材料与方法 1．1供试材料 供试菌株为烟草叶围分离微生物Tpb1～136，测试病原菌为强致病力烟草赤星病菌A． alternata，由田间分离获得。供试烟草品种为云烟85。 1．2叶围细菌的分离和纯化 将采集的烟草叶片用清水洗净并剪成2～3 cm的小段，用无菌水漂洗3次后，置于600mL 烧杯中，加入400mL无菌水和0．5 10 mL吐温·80，在摇床上振荡10min(1r／min，254-1℃)。取冲 洗液1 试菌株，并用Tpb编号。通过这种方法共得到136个菌株，臣[JTpbl～136。 1．3拮抗活性测定 菌的抑菌带宽度和病原菌的长、宽度。该试验重复2次，每次设3个重复。 1．4稳定性测定 将拮抗性好的菌株转移5代以上，继续观察其抑菌作用，测抑菌带宽度。 1．5离体叶片的防效测定筛选 7l D 参照FrabvelR【6】方法进行。盛防烟叶的托盘用70％酒精消毒并用无菌水冲洗，将对峙培 星病菌孢子液混合，吸取251al混合液悬滴接种于经表面消毒的烟草云烟85离体叶片上。每分离 物接种3片叶，每叶12滴，以PD培养基与等体积赤星病菌混合液接种的叶片作对照，26C保湿 培养。7d后统计病睛，计算病指及防效。 1．6细菌无菌滤液和赤星病菌孢子悬浮液的制备 mL Tpb88转至PDA培养基上，在26C下培养24h，然后在含100PD培养基的250ml的 液在4℃下保存备用。 取培养7—10d(26C)fl勺烟草赤星病菌配成悬浮液，1，500g离心3min去除菌丝，取上清， 将孢子浓度调为2，000s／mL，立即与等体积无菌滤液混合，孢子终浓度为1，000s／mL。 1．7菌株Tpb88无菌滤液对赤星病菌生长的影响 1．7．1对赤星病孢子萌发的抑制作用 上，保湿，室温下培养，于