发酵豆粕中抗原蛋白和不良寡糖的检测.doc

发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测 ——SDS法 1．适用范围 本标准适用于测定发酵豆粕中抗原蛋白的定性检测。 2．仪器设备 2.1蛋白电泳仪： 2.1.1 电泳仪；（建议使用：北京六一仪器DYY-2C型） 2.1.2 电泳槽；（建议使用：美国伯乐公司的mini型 ） 2.2 25μl微量进样器； 2.3 制胶装置；（与电泳槽配套出售，包括玻璃板(厚度分别为1.0 mm和 1.5mm各一套)，梳子，拨胶板） 2.4 移液枪(1000μl,200μl,10μl)以及其配套枪头；（属于常规实验耗材） 3．试剂 3.1 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED；（建议购至上海申能博彩，Chemisonic进口分装，必须要进口的产品！国产做出来的结果很差）；分析纯； 3.2 无水酒精，分析纯； 3.3 甘氨酸，分析纯； 3.4 Tris，分析纯； 3.5 考马斯亮兰R250，分析纯； 3.6甲醇，分析纯； 3.7 冰醋酸，分析纯； 3.8 甘油（丙三醇），分析纯； 3.9 β-巯基乙醇，分析纯； 3.10 溴酚蓝，分析纯； 3.11 HCl，分析纯； 4.试剂的配置 4.1 SDS溶液的配制： 30%丙烯酰胺的配制：丙烯酰胺 30.0g N’N-甲叉双丙烯酰胺 0.8g 去离子水定容至100ml 4.2 10%过硫酸铵：将1g过硫酸铵溶于10.00ml去离子水中。 2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8)：称取Tris 121.14g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至8.8(要求准确)。 1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8)：称取Tris 60.57g溶于500mL蒸馏水中，用浓盐酸调节pH至6.8(要求准确)。 10%SDS：称取5gSDS溶于50ml蒸馏水中。 1.0% 溴酚兰：称取0.05g溴酚兰溶于5ml蒸馏水中。 4.3 染色液：考马斯亮兰R250 0.25g 甲醇 45.40ml 冰醋酸 9.20ml 水 45.40ml 4.4 脱色液：甲醇 456.0ml 冰醋酸 72.0ml 水 472.0ml 4.5 4×分离胶缓冲液：2.00mol/L Tris-HCl(pH=8.8) 75ml 10%SDS 4ml 蒸馏水 21ml 10%过硫酸铵 5ml 4.6 4×堆积胶缓冲液：1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 50ml 10%SDS 4ml 蒸馏水 46ml 10%过硫酸铵 5ml 4.7 电泳缓冲液： Tris 3.0g 甘氨酸 14.4g SDS 1.0g 定容至1L，用HCl调节pH为8.3。 4.8 5×样品缓冲液（5×Loading buffer 蓝色）： 1.00mol/L Tris-HCl(pH=6.8) 0.6ml 50%甘油 5.0ml 10% SDS 2.0ml β-巯基乙醇 0.5ml 1.0% 溴酚兰 1.0ml 蒸馏水 0.9ml 4.9 5%浓缩胶的配制