某糖厂甘蔗堆放地土样中产木聚糖酶菌株的筛选和胁迫培养.pdfVIP

某糖厂甘蔗堆放地土样中产木聚糖酶 菌株的筛选和胁迫培养 吴葵、赵秀思、林恒先、梁郁强、姚冬生+ 暨南大学生命科技学院生物技术室，510632 木聚糖酶是一组可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的复合酶系。作用于主链的 加剂、功能性低聚木糖生产、果汁澄清、生产溶解性纤维素浆等，另外用木聚糖酶 来处理麦类淀粉原料中的半纤维素，可使淀粉分子最大程度地释放出来，降低粘性， 提高淀粉的利用率。造纸工业废料及农业废弃物中的木聚糖可被木聚糖酶转化为D 一木糖单体。而D一木糖又可被细菌、酵母及真菌转化成有价值的燃料。木聚糖酶 来源广泛，可以从植物中提取，也可以从微生物发酵获得，多种微生物——细菌、 链霉菌、青霉、木霉等可以生产木聚糖酶。据研究报道，微生物生产的木聚糖酶 多为诱导型，以木聚糖作为唯一炭源即可筛选出能产木聚糖酶。木聚糖酶在饲料 行业，造纸行业等的应用面临产量低、成本高、耐热性及抗酸，碱性酶难以获得 等问题，所以亟待获得更多的高产菌株及其基因，运用基因工程和蛋白质工程手段 来生产适于商业化应用的产品。本文报道参照马丁氏培养基方案用木聚糖作为唯 一炭源从某糖厂甘蔗渣堆放区的1号土壤中筛选出能产木聚糖酶的菌种。通过一 筛，复筛和三筛，得到了两株纯化的能够在以木聚糖作为唯一炭源的培养基中生 长的真菌。根据形态上的不同分别命名为l号菌(菌落呈斑点状，小而紧)和2 号菌(菌落呈雪花状，大而松)。并对其进行发酵培养，优化培养条件以获得高产 高活性的酶。 0．1％， 结果：初筛培养基：木聚糖1％，酵母粉O．5％，K2HP04‘3H20 0．05％，琼脂粉1．5％，2％去氧胆酸钠溶液2％，链霉素溶液(10000 MgS047H20 u／m1)O．33％，O．1％孟加拉红O．33％。初筛培养基参考马丁氏培养基配方，特点 是加入的孟加拉红和链霉素能有效的抑制细菌和放线菌的生长，而对真菌无抑制 作用。二筛培养基和初筛培养基基本相同，主要是要纯化出初筛分离到的两株真 0．1％， 菌。三筛培养基：木聚糖(sigma)1％，琼脂粉1．5％，K2HP04‘3H20 MgS047I-120 长以定性的检测两株菌株是否能产木聚糖酶。其结果是两株菌株都能够在选择培 养基上生长，因此可得出结论是1号菌种和2号菌种都能够产生木聚糖酶。1号菌 和2号菌分别进行发酵培养，初始pH7．0，定时取样，测pH和进行木聚糖酶活测 定，参照Bailey等的DNS方法，以木糖为标准，每分钟产生单位还原糖的酶量定 义为一个活力单位。l号菌pH快速达到8．5并维持稳定，菌体生长缓慢，采用pH7．0 磷酸钠缓冲液测活体系进行测活时酶活不高，最高70mg／L‘min。2号菌pH基本上 维持在初始pH7．0，茵体生长快速，采用pH7．0磷酸钠缓冲液测活体系进行测活时 最高酶活达到10lmg／L’min。 本文为寻找新的高产木聚糖酶微生物菌株作一些初步工作，为进一步的研究建立 了良好的基础。 本工作受广东省科技攻关计划项目(No．2005820601004)得资助，特此致谢! l84