同步培养方法.ppt

一、固体培养 好氧菌：试管斜面 培养皿琼脂平板 厌氧菌：培养基中需加入还原剂 高层琼脂柱 厌氧罐 厌氧手套箱 厌氧罐：抽气换气法或内源性产气袋排 空气；钯催化剂催化氢气反应除残氧； 美蓝指示剂显示无色 厌氧手套箱：箱内充混合气； 钯催化剂催化氢气反应除残氧； 有抽气换气室 分别列出两种实验室、生产常用的C源、N源。 从能源、氢供体、碳源方面综合考虑，微生物主要可分为哪几种营养类型？列表说明其各自特点，分别说明各类型能源、氢供体、基本碳源情况，并每个举一个例子。说明你对其中哪几个方面不理解或理解的较差？ 典型生长曲线可分： 延滞期 指数期 衰亡期 稳定期 1.延滞期(lag phase) 将少量菌种接入新鲜培养基后，在开始一段时间内菌数不立即增加，或增加很少，生长速度接近于零。也称延迟期、适应期、停滞期、调整期。 延滞期的特点：生长速率常数为0；细胞变大或增长； RNA含量增高，原生质呈嗜碱性； 分裂迟缓、合成代谢活跃； 对外界不良条件敏感 出现原因： 缺乏分解或催化底物的酶或辅酶 缺乏充足的中间代谢物 影响因子： 接种龄—对数期接种则延滞期短 接种量—接种量大则延滞期短 培养基成分—营养丰富的天然培养基、 接种前后培养基成分相差小则延滞期短 2.指数期（对数期, exponential phase） 对数生长期的细菌个体形态、化学组成和生理特性等均较一致，代谢旺盛、生长迅速、代时稳定，所以是研究微生物基本代谢的良好材料。它也常在生产上用作种子，使微生物发酵的延滞期缩短，提高经济效益 以最大的速率生长，细胞数量呈几何级数增加 特点：生长速率常数最大；细胞进行平衡生长； 酶系活跃，代谢旺盛 ①。 代时影响因子： 菌种:E.coli：12.5-17；结核分枝杆菌：792-932. 营养成分：营养丰富则短。37℃, E.coli在牛奶中代 时为 12.5 min, ，肉汤培养基中为17 min. 营养物浓度：浓度极低—影响生长速率和菌体产量 升高浓度—仅影响菌体产量 升高到一定程度—对生长速率和菌体产量无影响 培养温度的影响：教材155 生长限制因子：在微生物培养中，凡处于较低浓度范围 内可影响生长速率和菌体产量的某营养物 倍增时间：原生质增加一倍所需的时间。 纳米细菌（nanobacteria），三天才分裂一次； 九十年代初期从地下数公里发现的超微型细菌，用代谢产生的 CO2作指标，计算出这些超微菌的代谢速率仅为地上正常细菌 的10-15，有人认为它们需要100年才能分裂一次。 3.稳定期 (Stationary phase) 由于营养物质消耗、比例失调、代谢产物积累和pH等环境变化，逐步不适宜于细菌生长，导致生长速率常数降低直至零。 原因： 特点： ①微生物的生长处于动态平衡，培养物 中的细胞数目达到最高值。 ②开始积累内含物，产芽孢的细菌开始产芽孢。 ③此时期的微生物开始合成次生代谢产物。对于发酵生产来说，一般在稳定期的后期产物积累达到高峰，是最佳的收获时期。 4.衰亡期 细菌衰老并出现自溶，产生或释放出一些产物，如氨基酸、转化酶或抗生素等。细胞呈现多种形态，有时产生畸形，细胞大小悬殊。 死亡出生，分解代谢合成代谢 现象： 特点： 固体培养→液体培养→液体搅拌 单批培养→多级连续培养 微生物培养→动物、植物培养 遗传菌株培养 高密度培养 自动化培养 第四节 微生物培养法 研究进展 二、同步培养 1.概念 同步培养(synchronous culture)：是一种培养方法，它能使群体中不同步的细胞转变成能同时进行生长或分裂的群体细胞。 同步培养物常被用来研究在单个细胞上难以研究的生理与遗传特性和作为工业发酵的种子，它是一种理想的材料。 同步培养方法 机械方法 环境条件控制技术 离心方法 过滤分离法 硝酸纤维素滤膜法 氯霉素抑制蛋白 芽孢诱导发芽 光照和黑暗交替培养 温度 硝酸纤维素滤膜法 离心法 将微生物置于一定容积的培养基中，经过 培养生长，最后一次收获。 分批培养（batc