149培养基配制及适用性检查操作规程精编.doc

4定义 培养基：供微生物生长的人工配制养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及生长素和水等。应进行培养基的适用性检查。 5程序 5.1培养基的制备 按处方生产的符合规定的脱水培养基加水进行配制。 5.2 常用培养基的配制 5.2.1 营养琼脂培养基 5.2.1.1制法：称取脱水培养基粉末32g,加水至1000ml,煮沸，分装于250ml的锥形瓶中，每瓶200ml,用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。 5.2.1.2用途：供细菌计数微生物限度检查中的细菌数测定。 5.2.2玫瑰红钠琼脂培养基 5.2.2.1制法：称取脱水培养基粉末30.5g,加水至1000ml, 煮沸，分装于250ml的锥形瓶中，每瓶200ml,用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。 5.2.2.2用途：供霉菌、酵母菌检验。 5.2.3 胆盐乳糖培养基 5.2.3.1制法：称取脱水培养基粉末35.8g,加水至1000ml, 煮沸，分装于100ml的锥形瓶中，每瓶100ml,用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。 5.2.3.2用途：供大肠埃希菌检验。 5.2.4 4-甲基伞型酮葡萄糖苷酸（MUG）培养基 5.2.4.1制法：称取脱水培养基粉末2.33g,加水至100ml, 煮沸，分装于20ml的试管中，每支5ml,用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。 5.2.4.2用途：供大肠埃希菌检验 5.2.5 乳糖胆盐发酵培养基 5.2.5.1制法：称取脱水培养基粉末3.5g,加水至100ml, 煮沸，分装于25ml的试管中，每管10ml，用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。 5.2.5.2用途：大肠菌群检验 5.2.6硫乙醇盐流体培养基 5.2.6.1制法：称取脱水培养基粉末29.25g,加水至1000ml, 煮沸，分装于500ml的玻璃瓶中，每瓶300ml,用胶塞塞好，密封压盖。121℃灭菌15min，备用。 5.2.6.2用途：供需气菌、厌气菌检验 5.2.7改良马丁琼脂培养基 5.2.7.1制法：称取脱水培养基粉末28.5g,加水至1000ml, 煮沸，分装于500ml的玻璃瓶中， 每瓶300ml,用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。 5.2.7.2用途：供真菌检验 5.2.8 胰酪胨大豆琼脂培养基 5.2.8.1制法：称取脱水培养基粉末29 g,加水至1000ml,，煮沸，分装于250ml锥形瓶中, 每瓶200ml,用棉塞塞好，用两层牛皮纸包好，121℃灭菌15min，备用。 5.2.8.2用途：环境监测检验 5.2.9培养基平板及斜面的制备 5.2.9.1培养基平板：以无菌操作方法，将灭菌后的胰酪胨大豆琼脂培养基放冷至45 ℃左右，倾注到已灭菌的平皿中，每皿20～25ml（∮90mm）或9～11ml（∮55mm），待冷却凝固后，∮90mm的平皿以每11个平皿为1组，2层硫酸纸包好，∮55mm的平皿以15个平皿为1组，2层硫酸纸包好，置2～8℃冰箱中保存。 5.2.9.2斜面：以配制好的培养基分装于试管中，低层斜面培养基约占试管容积的1/5，高层短斜面培养基约占试管容积的1/3,灭菌后趁热放置成底层斜面或高层短斜面，待其凝固后使用，注意管口和瓶塞上勿沾有培养基，避免污染。 5.3培养基配制的注意事项 5.3.1采用干燥培养基，按说明配制，应对灭菌后的培养基pH值进行校验。 5.3.2配制的培养基不应有沉淀。如有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。 5.3.3培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。包装时，塞子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。 5.3.4培养基配制应在2h内灭菌，避免细菌繁殖。 5.3.5灭菌后的培养基应保存2～8℃，避光的环境，防止被污染，可在一周内用毕；制备好的培养基放置时间不宜过长，以免水分散失及染菌。 5.3.6用水浴加热溶化琼脂培养基，勿用电炉直接溶化琼脂培养基，以免营养成分过度受热而破坏。已溶化的培养基应一次用完，剩余培养基不宜再用。培养基不能反复加热溶化。 5.3.7贮存 干燥培养基应保存于阴凉干燥处，避免培养基因热或潮湿，造成含水分过高、结块、生霉直接影响培养基质量。 5.4培养基适用性检查 5.4.1计数培养基的适用性检查 5.4.1.1细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。 5.4.1.2菌种 大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B） 44 102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B） 26 003〕