DNA重组技术基本工具王京礼.pptVIP

知识回顾 1、限制性核酸内切酶：准确切割DNA；DNA连接酶：将DNA片段再连接起来；运载体：运输工具，将体外重组好的DNA导入受体细胞 。基因工程需要的工具有限制酶、DNA连接酶和运载体；需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶。 2、限制性核酸内切酶又称限制酶，其主要从原核生物中分离出来，能够识别特定的核苷酸序列，并在特定的部位进行切割。其作用部位为两个核苷酸之间的磷酸二酯键，形成黏性末端和平末端。 3、DNA连接酶是将DNA片段连接起来，恢复被限制酶切割开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。根据酶的来源不同，可分为从大肠杆菌中分离出来的E·coli DNA连接酶和从T4噬菌体中分离出来的 T4 DNA连接酶 ，前者只能连接黏性末端，后者既可以连接黏性末端也可以连接平末端，但连接平末端的效率比较低。 4、将外源（目的）基因送入受体细胞的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 ，常用质粒作为运载体，具有以下特点：（1）能自我复制（2）具有一个或多个限制酶切割位点，便于外源基因插入（3）具有标记基因，可以鉴定目的基因是否进入受体细胞。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 1.1 DNA重组技术的 基本工具 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 学习目标 1、简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用 2、总结基因工程运载体需要具备的条件 3、模拟制作DNA重组分子，培养学生合作、动手能力 4、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 预习反馈 1、问题 （1）三种工具及作用表述不确切（如分子运输车：质粒；限制酶：切割DNA分子，获取目的基因） （2）质粒的特点总结不全面 2、表扬 王福香、李浩、田雨、陈玉洁、刘荣、张慧君、赵伟、郑华涛、孙翰卿、徐小磊、孙希凯、任锡昌、张嘉楠、祝丽超、许玉萍、戴晶晶、王跃鹏、王天宇、刘丽庆 × × Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 合作探究 展示 点评 1、2、（1）② 2、（2） ② 2、（3）⑤ 反思总结 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. EcoRI （在G和A之间切割） Smal （在G和C之间切割） 黏性末端 平末端 同一种限制酶切割后形成的两个末端是什么关系？ 反向重复序列 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 练习 以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段： …CTGCA?? (2) …AC?? (3) GC… （4）…G? ? …G …TG?? CG… …CTTAA (5) G…? (6) …GC (7) GT…?? (8)AATTC… ACGTC… ????? …CG ???????CA… ?? ? G… ? ??请用DNA连接酶将它们连接起来: ____和____能连接; ____和____能连接; ____和____能连接; ____和____能连接。 2和7；3和6；4和8；1和5 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2