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第三章 细胞生物学研究方法 第一节 细胞形态结构的观察方法 一.光学显微镜技术 二.电子显微镜技术 三.扫描隧道显微镜 第二节 细胞组分的分析方法 一.用超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物 二.细胞内核酸、蛋白质、糖与脂质等成分的显示方法 三.特异蛋白抗原的定位与定性 四.细胞内特异核酸序列的定位与定性 五.应用放射自显影技术研究生物大分子在细胞内的合成动态 六.定量细胞化学分析技术 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 一.细胞培养 二.细胞工程 第四节 用于细胞生物学研究的模式生物 目的要求: 1.掌握普通复式光学显微镜技术 2.掌握细胞培养、细胞工程与显微操作技术 3.熟悉或了解荧光显微镜、电子显微镜等的应用原理 4.熟悉细胞组分的分析方法 重点 难点: 细胞组分的分析方法 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 电镜技术 推荐读物: 1. 2. 3. 计划学时:2 细胞生物学，同其他许多自然科学的学科一样，许多重要进展和新的发现，均与科技技术的进步与手段的革新密切相关。 第一节 细胞形态结构的观察方法 一.光学显微镜技术 （一）普通复式光学显微镜技术 (二) 相差和微分干涉显微镜技术 （三）荧光显微镜技术 荧光显微镜（fluorescence microscope）是以紫外线为光源来激发生物标本中的荧光物质，产生能观察到的各种颜色荧光的一种光学显微镜.利用它可研究荧光物质在组织和细胞内的分布。 荧光显微镜技术包括免疫荧光技术和荧光素直接标记技术. 生物样品中,某些细胞内的天然物质如叶绿素,经紫外线照射后能发出可见光线即荧光,这种由细胞本身存在的物质经紫外线照射后发出的荧光称自发荧光.另一些细胞内成分经紫外线照射后不发荧光,但经荧光染料进行活体染色或对固定后的切片进行染色,------如吖啶橙能对细胞DNA和RNA同时染色,显示出不同颜色的荧光,DNA呈绿色,RNA呈红色荧光.同样原理,荧光染料和抗体能共价结合,被标记的抗体和相应的抗原结合形成抗原抗体复合物,经激发后发射荧光,可观察了解抗原在细胞内的分布. △ 相差显微镜 相差显微镜（phase contrast microscope）是通过在物镜里增加一个相板，并在聚光镜上增加一个环形光阑，利用光衍射及干涉的特性，将通过标本不同区域的光波的相位差转变为振幅差，使活细胞或未经染色的标本内各种结构出现清晰的反差而被观察到。 观察活的培养细胞的结构常用倒置的相差显微镜,-------可清楚地观察到贴附在培养瓶底壁上的活细胞. （四）激光扫描共焦显微镜技术 激光扫描共焦显微镜（laser scanning confocal microscope）是在荧光显微镜成像的基础上装有激光扫描装置，以单色激光作为光源，使样品被激发出荧光，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像。 [适于观察活细胞的光学显微镜有哪几种?] [观察贴壁生长的培养动物细胞可用____显微镜;_____显微镜等] (五)荧光共振能量转移技术 是检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具,可用于检测某一细胞中两个蛋白质分子是否存在直接的相互作用. (六)荧光漂白恢复技术 使用与蛋白质或脂质耦联的亲脂性或亲水性的荧光分子,如荧光素、绿色荧光蛋白等,检测活体细胞表面或细胞内部的分子运动以及在各种结构上分子动态变化率的大小. 二.电子显微镜技术 电子显微镜（electron microscope）是一种用以观察样品形貌结构的高度精密的大型仪器。 (一) 电子显微镜的基本知识 1.E/M与L/M的基本区别 E/M的高分辨率主要是因为使用了波长比可见光短得多的电子束作为光源,波长一般小于0.1nm;由于光源的不同,又决定了E/M与L/M的一系列不同点: 用电磁透镜聚焦;电镜镜筒要求