1.1DNA重组技术的基本工具.docVIP

1.1DNA重组技术的基本工具 1、基因工程又叫做_基因拼接____技术或DNA重组_技术，是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性_，从而创造出更符合人们需要的新的_生物类型__和__生物产品__。作用：将两个DNA分子片段“____”起来，恢复被________切开了的两个核苷酸之间的________。氢键的结合不需要酶的催化,适宜的条件下依靠碱基之间的分子间作用力结合.常用载体——质粒 质粒是一种________的、结构________、独立于细菌________之外，并具有____________能力的______分子。 主要是指编码蛋白质的，也可以是一些具有_____。操作程序：目的基因表达载体提纯 从雌性动物体内取卵 （或受精卵）　　　 显微 注射 　　受精卵发育 早期培养 雌性动物的 输卵管 或 子宫 内　　　新性状动物 4、将目的基因导入微生物细胞 　　　①原核生物特点： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ②转化：第一步：用 Ca+ 处理，使细胞处于 一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 ，这种细胞称为 感受态细胞 ； 第二步：将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。 （四）目的基因的检测与鉴定 1、检测：①检测转基因生物 DNA 是否插入的目的基因，这是目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键。方法：采用 DNA分子杂交技术 。　如显示 杂交带 则表明目的基因已插入染色体DNA中。 ②检测目的基因是否 转录出mRNA ；方法：采用 分子杂交技术 。 ③检测目的基因是否 翻译成蛋白质 ；方法：从转基因生物中提取 蛋白质 ，用相应的抗体进行 抗原-抗体杂交 ，若有 杂交带 的出现，表明目的基因已形成蛋白质产品。 2、鉴定：除分子水平检测外，还可以进行 个体 水平鉴定。例如，一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞后，是否赋予了植物抗虫或抗病特性，需要做 抗虫或者抗病的接种实验 ，以确定是否具有抗性及抗性的程度，又如，有的基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较，以确定 转基因产品的功能活性是否与天然产品相同 1.3基因工程的应用 植物基因工程技术主要用于提高农作物的 抗逆 能力，以及改良农作物的 品质 和利用植物生产 药物 等方面 乳腺生物反应器的构建：将 药用蛋白 基因与 乳腺蛋白基因 的 启动子 等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的 受精卵 中，然后，将受精卵送入母体内，使其生物发育成转基因动物。 用动物器官来解决人类器官移植的问题，最大难题是 免疫排斥 ，利用基因工程方法对猪的器官进行改造，方法是将器官供体基因组导入某种调节因子，以抑制 抗原决定 基因的表达，或设法除去 抗原决定 基因，再结合 克隆 技术，培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆猪器官。 基因治疗是把 正常基因 导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。目前处于初期的临床实验 阶段。 1、4蛋白质工程的崛起 1、基因工程在原则上只能生产 自然界中已经存在 的蛋白质, 天然蛋白质的____________符合_____生存的需要，却不一定完全符合人类生产和生活的需要。、蛋白质工程的目标是：根据人们对 的特定需求，对 进行分子设计。由于基因决定蛋白质，因此要对蛋白质的结构进行设计改造，最终还必须通过 基因 来完成。 3、天然蛋白质的合成过程： 4、蛋白质工程的基本途径：