实验十九血细胞的分类测定与应用.pptVIP

实验十九 血细胞的分类测定与应用 1 实验目的 ⑴了解血细胞的测定的方法。 ⑵掌握血细胞的正常值及应用意义。 2 实验原理 把用等渗电解质溶液（被称为稀释液，diluent）稀释的细胞悬液倒入一个不导电的容器中，将小孔管插到细胞悬液中。 小孔管是电阻抗法细胞计数的一个重要的组成部分，其内侧充满了稀释液，并有一个内电极，外侧细胞悬液中有一个外电极。 检测期间，当电流以接通通后，位于小孔两侧的电极产生稳定的电流。稀释液通过小孔孔管壁上固有的小孔（直径一般100μm.厚度为75μm左右）向小孔内部流动。因为小孔这壁充满了具有专导性的液体，其电子脉冲是稳定的。 如果供给电流I和阻抗Z是稳定的，根据欧姆定期律通过小孔的电压E也是不变的（这时E=IZ）。当有一个细胞通过小孔时，由于细胞的导电性质比稀释液要低，在电路中小孔感应区内的电阻的增加，于瞬间能上能下起了电压变化而出现一个脉冲信号，自然数为通过脉冲。 电压增加的变化的程度取决于非传导的细胞占据小孔感应区的体积，即细胞体积越大，引起的脉冲越，产生的脉冲振幅越高，脉冲信号经过下列步骤，得出细胞计数结果。 ⑴放大：必须通过电子放大器械，将微伏讯号放大为优级脉冲扭号。 ⑵甄别：通过微孔时的各种微粒均可产生相应脉冲讯号，讯号电平（脉冲幅度）与微粒在小成正比。因除血细胞外，血中细胞外，血中细胞碎片、稀释液中杂质微粒均可产生假讯号，使计数结果偏高。所谓甄别就是利用甄别器根据阈值调节器提供的参考电平，将低于参考电平的假讯号去掉，以提高细胞计数的准确性。 ⑶阈值：在一定范围内调节参考电平的大小，使计数结果可能符合实际。 ⑷整形：经过放大和甄别后的细胞脉冲讯号波形尚不一致必须经过整形器作用，修整为形伏一致标准的平顶波后，才能触发电路。 ⑸计数：血细胞的脉冲信号，经过放大、甄别、整形后，送入计数系统。各型血液分析仪器计数系统甄别方式不同，通过各种方式得出计数结果。 图3-9 电阻抗法血细胞计数原理 3 实验器材与试剂 ⑴器材 BC-3000全自动血细胞分析仪；1.5ml离心管；采血针；吸液球；吸血管；移液枪 ⑵试剂 血液细胞分析仪用溶血剂（V-28CFL无氰溶血剂）；肝素抗凝剂；生理盐水 4实验方法与步骤 利用BC-3000全自动三分类血细胞仪测定血细胞参数： 红细胞数（RBC）、血红蛋白（HGB）和红细胞压积（HCT）、平均血红蛋白含量（MCH）、平均血球体积（MCV）、平均血球血红蛋白含量（MCHC）、白细胞数（WBC）、淋巴细胞数（Lymph）、中间细胞数（Mid）、中性粒细胞（Gran）、血小板数（FLT）、血小板分布宽度（PDW）和平均血小板体积MPV (fl)。 ⑴开机前的准备:检查试剂是否足量，有无浑浊变质，试剂管道有无扭结，倒空废液瓶。 ⑵开机:按下机器后部的开关键，约一分钟后出现计数界面。 ⑶本底检查:按“开始”键，机器计数本底。本底结果要求 WBC≤0.3，RBC≤0.03，HGB≤1，PLT≤10 ⑴开机前的准备⑵开机⑶本底检查 ⑷ 测量 ①全血测量：按“菜单”选择“模式”项，将模式设置为“全血”。用EDTA二钾作抗凝剂取凝血标本（EDTA二钾用量为1.5-2.2mg/ml血）。混匀抗凝血，让采样针插入抗凝血。按“开始”键测量样本 ②末梢血测量：按“菜单”选择“模式”项，将模式设置为“预稀释”。按“稀释液”，按“开始”键，自采样针下取1.6ml稀释液。将毛细吸管采取20μl末梢血标本迅速注入1.6ml稀释液杯中，制成稀释血样（注意针刺得要深，用不起毛的纸巾拭去第一滴血）制好稀释血样要摇匀（用拇指及食指捏住杯上部，用腕部旋转约一分钟左右，注意不要剧烈震荡，否则有可能计数不准），放置5分钟后，再摇匀。将稀释血样放于采样针下，按“开始”键计数。 ⑷ 测量 ⑸打印报告单 ⑹关机 每天测试完毕一定要用E-Z液执行“关机”程序。等约一分钟后，屏幕提示可以关闭电源后关掉主机电源。 ⑸打印报告单⑹关机 参数 缩写 单位 正常值 白细胞数目 WBC 109/L 4.0≤WBC≤10.0 红细胞数目 RBC 109/L 3.50≤RBC≤5.50 血红蛋白 HGB g/L 110≤HGB≤160 血小板数目 PLT 109/L 100≤PLT≤300 淋巴细胞百分比 Lymph% % 20.0≤Lymph%≤40.0 中间细胞百分比 Mid% % 3.0≤Mid%≤9.0 中性粒细胞百分比 Gran% % 50.0≤Gran%≤70.0 平均红细胞体积 MCV Fl 82.0≤MCV≤95.0 红细胞分布宽度变异系数 RDW-CV % 11.5≤RDW-CV≤14.5 红细胞分布宽度标准差 RDW-SD Fl 35.0≤RDW-SD≤56.0 表3-19 全自动血细胞检