急性肾功能衰竭.docVIP

急性肾功能衰竭 【目的和原理】 通过注射HgCl2造成重金属汞中毒，复制急性中毒性肾功能衰竭的动物模型。汞可引起肾小管上皮细胞变性坏死，坏死脱落的上皮细胞可在小管内形成各种管型，阻塞肾小管管腔，使原尿不易通过，同时由于管腔内压升高，引起有效滤过压降低，从而使肾小球滤过率降低，导致肾泌尿功能障碍，形成少尿。 本实验通过复制中毒性肾功能衰竭的动物模型来观察升汞中毒家兔的一般状态、尿的变化、血尿素氮水平、内生肌酐清除率及酚红排泄率等变化，以了解肾功能的情况，并观察肾脏形态改变。并根据实验指标，判断、分析及讨论急性肾衰的发病机理。 【实验对象】 家兔。 【实验器材和药品】 离心机、分光光度计、水浴锅、电炉、注射器（5ml）、输液瓶、胶管、螺旋夹、滴管、吸管、离心管、试管、试管夹、试管架、酒精灯、手术器械一套、输尿管塑料插管、显微镜、玻片。 1％普鲁卡因、氯化高汞（HgCl2）溶液、标准尿素氮溶液、二乙酰-肟-氨硫脲（DAM-TSC）液、酸混合液、5％醋酸溶液、尿素氮标准应用液Ⅱ、肌酐标准应用液、苦味酸、酚红、氢氧化钠。 【实验步骤】 1．取两只家兔作为中毒兔和对照兔，于实验前2天称重后，中毒兔皮下或肌肉注射 1％ HgCl2 1.5ml/kg，造成急性中毒性肾病模型，对照兔则在相同部位注射同量的生理盐水，作为对照备用。两兔实验前均喂少量蔬菜。 2．实验开始，兔称重后固定于兔台，剪去下腹部毛，用1％普鲁卡因作浸润麻醉，在耻骨联合上1.5cm处向上作正中切口长约4cm。分离皮下组织，沿腹白线切开腹腔，按3.8所示方法插双侧输尿道插管，收集尿液。 3．在输尿管插管后从耳缘静脉缓慢输注10％葡萄糖液（50ml/kg），以保证家兔有足够尿量。 4．分离一侧颈总动脉，插入动脉插管，结扎固定，以备抽血检查。 5．尿蛋白定性检查：取正常及中毒兔尿液约3ml分别放入试管中，以试管夹夹住试管，在酒精灯上加热至沸腾（试管口不要对着人，小心加热，切勿让试管内尿液溢出）。若有浑浊，加入5％醋酸3～5滴，再煮沸，若尿液变清，是尿内尿酸盐所致；若浑浊加重，则表示尿中含有蛋白。根据尿液浑浊程度可按下面标准判定结果： “-”表示尿液清晰不显浑浊； “+”表示尿液出现轻度白色浑浊（含蛋白质0.01～0.05g％）； “++”表示尿液稀薄乳样浑浊（含蛋白质0.05～0.2g％）； “+++”表示尿液乳浊或有少量絮片存在(含蛋白质0.2～0.5g％)； “++++”表示尿液出现絮状浑浊（含蛋白质0.5g％）。 6．尿液镜检：取一定量的尿液置于离心管中离心沉淀（1500rpm）5min，取尿沉渣涂片显微镜下观察(先低倍后高倍)，看是否有管型和上皮细胞。 7．血清尿素氮（BUN）测定： （1）从动脉插管放血5ml，待凝固后，离心10min（2000rpm）。用滴管将血清吸出，分别移入干燥的小试管中备用。 （2）原理：血液和尿中的尿素在强酸条件下与二乙酰-肟和氨硫脲煮沸，生成红色复合物（二嗪衍生物）。 （1）操作方法见表9-6-1。 表9-6-1 血清尿素氮测定 试 剂（ml） 测定管A 测定管B 标准管 空白管 血清 0.02 0.02 - - 水 0.5 0.5 0.1 0.5 标准应用液Ⅱ - - 0.4 - DAM-TSC液 0.5 0.5 0.5 0.5 酸混合液 4.0 4.0 4.0 4.0 (测定管A为正常家兔血清，测定管B为中毒家兔血清) 混匀后，置沸水锅中准确煮沸10min，置流水中冷却3min后，用520nm波长或绿色滤光板比色，以空白管或蒸馏水调零。注意在加入标准应用液Ⅱ1~2min内把试管置沸水锅中。 （4）计算： BUN （mmol/L）= BUN（mg%）×0.357 8．血、尿肌酐测定方法（见表9-6-2）和内生肌酐清除率的计算 从颈总动脉取血置盛有肝素的离心管内，离心后取血浆，按表9-6-2进行实验。 表9-6-2 血浆和尿液肌酐含量测定 试剂（ml） 标准管S 标准空白管S0 测定管R 测定空白管R0 肌酐标准液 0．25 0．25 - - 血浆或尿液 - - 0．25 0．25 测定苦味酸 5．0 - 5．0 - 空白苦味酸 - 5．0 - 5．0 加完上述试剂后混匀，置37℃水浴20min，再放到冷水盆中转动1min使冷却，在520nm波长处各以其相应的空白管调零，比色测定各管的光密度。本实验所需试剂宜在使用前两周内配制，逾期则苦味酸颜色加深，光密度值随之增高，影响检测结果。苦味酸具有爆炸性，配制该试剂时应先在容器内加少许蒸馏水，以防意外。 计算：