第六章常用分子生物学技术2幻灯片.pptVIP

高度特异的抑制某一mRNA的翻译，从而抑制相应基因的功能。 不影响邻近基因的正常表达。 反义药物 应用的“瓶颈” 细胞内大量核酸酶对反义核酸的降解; 反义药物高浓度的使用带来的毒副作用的增加和治疗费用的增加。 反义药物的优点及应用的“瓶颈” 优 点 * 1、名词解释： PCR、RNAi、反义核酸 2、简述反义药物的优点及应用“瓶颈”。 3、简述RNA干扰技术的应用。 思 考 题 思考题 * 反义核酸及药物 — 概述 翻译水平 蛋白质的合成 * 3. 反义核酸的分类 反义核酸及药物 — 概述 * 反义核酸及药物 一、概述 二、反义技术及药物 三、反义核酸的应用 * 反义核酸及药物 反义技术 根据碱基互补原理，用人工合成或生物体合成特定互补的DNA或RNA片段，抑制或封闭基因表达的技术。 定 义 * 反义药物 定 义 利用反义技术，设计出与致病有关的基因及其mRNA互补的反义“封条”（DNA或RNA片段），通过特异封闭这些基因不让它们表达或复制，从而达到治疗疾病的目的。 反义核酸及药物 * 反义核酸及药物 反义寡核苷酸 细胞核 目标基因 转录 细胞质 核糖体 翻译抑制 mRNA 断裂 * 反义药物 分 类 反义核酸及药物 * 第一代：反义DNA 第二代：反义RNA 第三代：肽核酸 反义DNA 定义：人工合成的与待封闭基因的某一区段上互补的正常或化学修饰的DNA片段，用来抑制、封闭这一基因的表达。 * 反义DNA 化学修饰的目的： 更好地解决进入细胞的问题 稳定、特异地和靶mRNA结合 激活核酸酶降解mRNA * 反义RNA 定义：与目的RNA序列互补的RNA片段，通过配对碱基间氢键作用，与对应的RNA形成双链复合物而影响靶RNA的正常修饰、翻译等过程，从而抑制或封闭靶RNA的功能。 来源：重组DNA技术、人工合成、人工修饰 * 1 定 义 在特定肽链上连接不同的碱基，即以类氨基多肽链代替核酸中的核糖磷酸骨架，并按一定的序列结合上标准的A、T、C、G碱基所形成的肽核酸，它能与互补DNA或RNA特异结合，从而封闭靶基因的表达。 肽核酸―第三代反义寡核苷酸 * 2 特 点 与靶基因结合能力强 稳定性好，易吸收 在体内有内切酶活性和抑制端粒作用 肽核酸―第三代反义寡核苷酸 * 第四节 反义核酸及药物 一、概述 二、反义核酸及药物 三、反义核酸的应用 * 抗肿瘤 治疗 对于反义药物而言，它能特异阻断肿瘤细胞内癌基因、原癌基因的表达，且不影响其他基因的正常表达 。 反义核酸为肿瘤治疗开辟了一条新的道路。 反义核酸及药物 --- 应用 * Add your text in here 抗肿瘤治疗的方案 抑制癌基因的表达 用反义核酸技术在癌基因表达时与其mRNA特异性结合，阻断癌基因的表达，也可应用核酶降解癌基因mRNA。 * 反义核酸及药物 --- 应用 myc原癌基因家族--- c-myc * 反义核酸及药物 --- 应用 福米韦生（Vitravene， ISIS2922）： 唯一被美国食品药品管理局（FDA） 批准上市的反义核酸药物。 * 反义核酸及药物 --- 应用 科学研究成果 临 床 应 用 * 高度特异的抑制某一mRNA的翻译，从而抑制相应基因的功能。 不影响邻近基因的正常表达。 反义药物 应用的“瓶颈” 细胞内大量核酸酶对反义核酸的降解; 反义药物高浓度的使用带来的毒副作用的增加和治疗费用的增加。 反义药物的优点及应用的“瓶颈” 优 点 * 第六章 常用分子生物学技术 （小 结） * 第六章 常用分子生物学技术 第一节 分子杂交技术 第二节 目的基因制备技术 第三节 基因敲除技术 第四节 RNA干扰技术 补充：反义核酸及药物（第八章P202） * 核酸的分子杂交： 碱基序列互补的单链核酸，根据碱基互补原则，借助氢键相连而形成双链杂交分子的过程。 第一节 分子杂交技术—基本原理 * 1.Southern印迹杂交法： 检测特异DNA片段 2.Nouthern印迹杂交法： 检测特异的RNA片段 3.Western印迹杂交法： 检测蛋白质 第一节 分子杂交技术 – 应用 * 第一节 分子杂交技术 – 应用 基因芯片在药物研究方面的贡献 用于药物作用新靶标的发现。 进行药物作用机制的研究。 用于药物基因组学研究，实施个体化治疗。 进行毒理学研究, 用于药品安全性评价。 * 第二节 目的基因制备