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分析CS-US 非配对刺激易化豚鼠瞬目条件反射的建立 　　　　经典瞬目条件反射(Eyeblink conditioning， EBC)是研究联合型学习神经生物学机制的重要模型。经典EBC的建立过程需要联合给予条件刺激(Conditionedstimulus， CS)和非条件刺激(Unconditioned stimulus，US)，即配对刺激。根据CS与US出现的时间关系，EBC可分为延迟性瞬目条件反射(Delay eyeblink conditioning，DEBC)和痕迹性瞬目条件反射(Trace eyeblinkconditioning， TEBC)两类基本模式。在两类模式中CS均先于US出现，但在DEBC中， CS与US同时结束，即CS末段与US重叠，而在TEBC中， CS结束一段时间后US才开始出现，即两者之间存在一个刺激空白间隔期。长期以来两类EBC行为在学习记忆神经机理研究领域均得到广泛应用。条件反射的迁移效应是指一种感觉模式CS 所引导的条件反射学习可以易化后续的由另一种感觉模式CS 所引导的行为学习，由于EBC 具有简单和易于测控等优点，已渐成为条件反射迁移效应研究的主要行为模型。本实验室的近期研究对于由内侧前额叶施加微电流刺激作为中枢CS(Electrical stimulation of the medial prefrontalcortex as CS，即mPFC CS)及纯音刺激作为外周CS(ToneCS)所引导的EBC 行为能否相互迁移进行了观察，实验结果肯定了两类CS 所引导行为之间的迁移效应，并比较了DEBC 与TEBC 迁移效应的差异。最近我们采用微电流刺激海马作为中枢CS(Electrical stimulation of thehippocampus as CS， 即 Hip. CS)也有类似结果。值得注意的是上述实验中非配对组的结果提示：先期的CS 及US 的非配对刺激似乎能提高后续的经典EBC 的CR 百分率。这引出一个相关领域过去未曾重视的问题：CS-US的非配对刺激能否易化经典条件反射的建立。研究非配对刺激对于EBC 的易化效应及其机制有助于最终阐明简单条件反射甚至复杂学习记忆行为的脑机制，因此，为了系统观察和分析非配对刺激对于EBC 的易化效应及其可能机制，本研究对外周听觉CS 及中枢mPFC CS、Hip. CS引导的非配对训练对于后续TEBC 及DEBC 建立的影响作了深入探讨。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　实验选用健康雄性英国种白化豚鼠96 只(4～5 月龄)，体质量500～550 g，由重庆医科大学实验动物中心提供，所有动物均单笼饲养，自由饮水和进食，饲养于温度为(25plusmn;1)C 的动物室内，24 h 循环灯照。 　　1.2 手术 　　以 1%戊巴比妥钠(0.1 mL/100 g)和速眠新Ⅱ(0.1mL)混合肌注麻醉豚鼠，将其头部固定于脑立体定位仪上(SR-6N，Narishige，Tokyo，Japan)。在暴露的颅骨上钻开5 个直径约1.0 mm的小孔(坐标：孔1 和2：AP 2 mm，RL 4 mm;孔3 和4：AP 10 mm，RL 4 mm;孔5：AP 13.0mm (mPFC)或AP 6.0 mm (Hip.)，R 1.0 mm (mPFC)或R 5.0 mm (Hip.)，H 2.5 mm (mPFC)或H 4.5 mm(Hip.);分别用四颗已消毒的不锈钢螺丝钉(直径：1.0mm，螺距：400 mu;m，重量：0.3g)反旋入1～4 号小孔内作为牙科水泥固定的支点。将不锈钢双极刺激电极植入孔5，电极尖端位置分别是：mPFC(AP 13.0 mm，R 1.0mm，H 2.5 mm);Hip.(AP 6.0 mm，R 5.0 mm，H 4.5 mm)。将矩形头部固定支架嵌合在不锈钢螺钉之间，用牙科水泥固定螺钉和电极。术后恢复1 周，待全身和眨眼状况恢复良好后开始行为训练。 　　1.3 行为训练行为训练在隔光、隔音的屏蔽柜内进行。以对内侧前额叶或海马的微电流刺激作为中枢CS (mPFC CS 或Hip.CS)，以纯音刺激(350 ms，2 kHz 正弦波，85-90 dB)作为外周CS(Tone CS)，以角膜吹气(100 ms、3 psi)作为US，所有豚鼠首先经历3d 的适应期(30 min/d)，在此期间不给动物施与任何刺激。随后，实验组动物(8 组，每组动物n=4)首先接受为期1 周的中枢或外周CS-US非配对训练，然后转换CS 并进行为期6 d 的配对训练，对照组动物(8 组，每组动物n=8)直接接受中枢或外周CS-US 配对训练。训练时豚鼠被放置于特制的有