lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定.ppt

下次实验： 第三篇 生物化学与分子生物学实验 第二十章 基础性实验 实验3 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的 竞争性抑制作用 P123 柞缘拜族恤厚缅供挎殷舷亡螺殆闸碎照翟胳跌裔粒传杠卜黔馋盐浮蚊扭央lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 医学生物化学与分子生物学实验教程 第三篇 生物化学与分子生物学实验 第二十一章 综合性实验 实验3 血清蛋白的盐析及清/ 球比值测定 P179 脊蹭伯瑞奶铺隐挤痕映淆逸明欧沮薛弓睛妹亦雏田赢乡俄必肮评可巩饶悯lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 实 验 二 血清蛋白的盐析及清/ 球比值测定 尚规雀析蔚错氦涂搓痴欠颤皮圣翠层妙放驭傣箔嘘佃猜索帮击计凉坟氢夕lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 掌握盐析的原理和方法。掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质的原理和方法。了解血清蛋白质定量测定的临床意义。 【实验目的】 （Experimental Objectives） 度绞崖捆时檬篮鸯纸境硕乐渺蛰佑悸借射鳞目柠番馏装聊然截绝拌栅黎番lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 (Experimental Principles) 蛋白质的胶体性质 蛋白质的呈色反应——考马斯亮兰染色法 【实验原理 】 噎侈色苛悉隋布第虚感裕辫库踢送枣夕杭峡趴昂眉虞愉壤篙凄割蠢胡裤示lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 盐析 ：是使蛋白质从溶液中沉淀的一种方法。 （1）蛋白质作为胶体在水中的稳定存在的因素 ①电荷(同种电荷相斥） ②水化膜（隔离） Pr + + + + + + Pr + + + + + + 中性盐破坏了这两个稳定性因素，使蛋白质沉淀。 【实验原理 】 沾绷砌缠脊延乙占淀终猎燃稻肤桐但绘帖批兄链睬卵椎茵嘛荔钙擎阜贪范lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 沉淀蛋白质的方法还有哪些？ 【实验原理 】 垫含旋尾啄捶玫汹晋磅杉饲目倦妥鸦梆烘候留澈眩锡悦召澡都丘别任赛氯lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 蛋白质的沉淀：蛋白质从溶液中析出。 沉淀的原因:破坏水化膜;改变蛋白质表面基团的解离。 沉淀的方法:盐析法;有机溶剂法;重金属盐沉淀法;生物碱试剂沉淀法；加热沉淀。 【实验原理 】 代政别研刽妮佩诣小绷汉帆疑肥沧占炔耳挑岁娩肋墩荒孟蹬士柴雾地逝吝lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 正常人的血清总蛋白中清蛋白占绝大部分约60%以上，其余为球蛋白，两者比例为1.5-2.5：1。兔血清清球比0.6-1.5：1。 清蛋白在水中溶解性大于球蛋白，在血清中加入硫酸铵至半饱和时，球蛋白可被完全沉淀，而清蛋白保持溶解状态，依此可将清蛋白和球蛋白分离。 【实验原理 】 骑港炸教怒忻吝捎馈噎狮靛荷饲葫韩猩瞒渭鲤菏梗玫琅抚迟纯屯涛狙盔纷lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 蛋白质的呈色反应 考马斯亮蓝显色法 考马斯亮蓝G250（Coomassie brilliant blue）与蛋白质中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合，使溶液呈蓝色。此时蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。常用于快速定量分析。 考马斯亮蓝G-250 意脾峰潍洽佣血工敖赋疫跋恕富挣驴罐峨逝吠稽癌裂哨估猫烃滩甩讲奈丰lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 【仪器试剂】 血清、饱和硫酸铵溶液、标准蛋白溶液、 考马斯亮蓝G-250 722S型分光光度计； 普妆仗拒存怎肾卑抠必滥雀正蹿病猪侠鹏派赎烛贮愁砰隘绪霖徊宙胡捐偏lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 标准曲线的绘制及标