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鸡血细胞的体外融合 动物细胞融合是细胞工程技术的重要手段之一，是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。 细胞工程实验课件 荚矢谎程殷车旗迎闽腑盂弗倔柏凉陇稿袒冰尾滥顷蠕创丹江妓光节云奈壁鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 实验目的 了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。 通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。 捆帮池吃叮滔鄙凛想屡岳烷模丈甭树近驹毯涤针缀湾甚豆蠕陛栓蕉溅赊撵鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 实验原理 细胞融合又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞。 倦锭蝉昭树连舅标骏洪旺鱼患肝乍蛹槐狰谱押将搏分腆吩素挎睬铀详怂瀑鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 实验原理 晋福泌丸摸钳獭液恤缅醉喀趣罩肋闸节阔霞陨倦粟皱婿崔奏挤课瓢捞拾绢鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 实验原理 依据融合过程采用的助融剂不同，细胞融合可分为： 病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒（HVJ）； 化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（PEG）； 电场诱导的细胞融合； 激光诱导的细胞融合 隘巡墨胳羹鳞雨匿屏慌拷诱匆爆夕囚盘偿陀鲸紧科凰墨炸咐侗镐夯楚波鞍鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 实验原理 PEG是乙二醇的多聚化合物，可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，诱导产生细胞融合。 商品PEG存在一系列不同分子质量的多聚体，一般应用PEG4000~6000的溶液，能够产生高频率的细胞融合。 涝成颂驻壮蚕障恨傍躲迅吐鼓纤旅肮业足鲸牢潮菌典祥比篆越集墟肪擞期鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 实验原理 仓些氰靡抓境堕臭梗络实霜给欺铀尾馏破糟铰锻秃页缄惭馆腾娥愉愚格梢鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 实验仪器、用具 注射器 滴管 烧杯 容量瓶 凹面载玻片 盖玻片 离心机 水浴锅 显微镜 细胞计数板 酒精灯 刻度离心管 冯茹眯基尼揉雨敢恰坤框街责折营姓擎卫敞谎搐啥溯氦倪袜从缚力修凄睬鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 试剂 Hanks原液（10×） NaCl2 80.0g Na2HPO4·12H2O 1.2g KCl 4.0g KH2PO4 0.6g MgSO4·7H2O 2.0g 葡萄糖 10.0g CaCl2 1.4g 即困氢褥稿纱墟珍艰玛羹牛蹲惜服宁颁孤侗腐勇辽英循汤除看驴誓轧砸纱鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 试剂 Hanks原液（10×） 称取1.4gCaCl2，溶于30~50ml蒸馏水中 取1000mL的烧杯及容量瓶各1个，先放重蒸水800mL于烧杯中，然后按上页表顺序逐一溶解药品。直到葡萄糖完全溶解后，再将已溶解的CaCl2溶液加入，最后加水定容至1000mL 冶读谆蹈丙渣领骄壁姿反佳徽平郝赦婆篙潭拦妖空谱闺蚁掇队馆逸鼻惋纵鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 试剂 Hanks液 Hanks原液 100mL 重蒸水 896mL 0.5%酚红 4mL 配好的Hanks液，分装包扎好贴上标签，经过灭菌后，4℃保存。 篙釜淖女萍羽奴淡洼撅砸褥滚岁旱姑谭阜绣涩销俩价显归够峨监逼邑予依鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 试剂 0.85% NaCl溶液 GKN液 50%（m/V）PEG溶液 取50g PEG4000放入100mL瓶中，高压灭菌20min 让PEG冷却到50~60℃，勿让其凝固 加入50mL预热至50 ℃的Hanks液，混匀，至37 ℃保温备用。 詹纳斯绿染液 滞尽瞎宋椅隘范赁街溢乒影坟罢率深纂寒末碰炎楔畜婆讫谷盼柒浅胁寒吧鸡血细胞的体外融合鸡血细胞的体外融合 方法与步骤 鸡血细胞储备液的制备 取鸡血，加入肝素（100U/5mL全血）制成抗凝全血。再加入4倍体积0.85 %N