血球计数板使用及相关计算.ppt

* * 血球计数板 使用及相关计算 成成中学 张旭辉 血球计数板的使用方法步骤 1．镜检。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数； 2．加样。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去； 3．计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。 4．清洁。血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。 计数培养液中酵母菌种群数量的要点： 1．每天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。 2．从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。 3．如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释。具体方法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。 4．活酵母有出芽生殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。 5．对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。 6．计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算，对每个样品可计数三次，再取其平均值。 例1、有关“探究培养液中酵母菌数量动态变化”的实验，正确的叙述是 A．改变培养液的pH值不影响K值（环境容纳量）大小 B．用样方法调查玻璃容器中酵母菌数量的变化 C．取适量培养液滴于普通载玻片后对酵母菌准确计数 D．营养条件并非影响酵母菌种群数量变化的唯一因素 （参考答案：D） 例2、为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某同学进行了如下操作。其中操作正确的有 ▲ (填下列操作的序号)。 ①将适量干酵母放入装有一定浓度葡萄糖溶液的锥形瓶中，在适宜条件下培养 ②静置一段时间后，用吸管从锥形瓶中吸取培养液 ③在血球计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片 ④用滤纸吸除血球计数板边缘多余培养液 ⑤将计数板放在载物台中央，待酵母菌沉降到计数室底部，在显微镜下观察、计数 参考答案： ①④⑤ 例3、（2008江苏高考31．） （4）在探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液计数的做法是错误的，正确的方法是 ▲ 和 ▲ 。 （5）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的做法是错误的，正确的方法是 ▲ 。 （参考答案（4）摇匀培养液后再取样 样液稀释后再计数（5）浸泡和冲洗） 推导：1mm×1mm方格的计数1mm×1mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于计数室厚度为0.1mm，所以计数室的总体积为0.1mm3。 1．16×25型的计数公式：? ?酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数 2．25×16型的计数公式： ? ?酵母细胞个数／1mL＝80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数 假设：计数室内酵母菌为a个，稀释倍数为b，则10mL培养液中酵母菌总数为： a×105×b 例4、通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先 ▲ 后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有 ▲ 个。 （参考答案：稀释；2×108） 5×400×10000×10＝2×108 。 例5、 检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0．1 mm3。 现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻 ▲个／mL。 （参考