011第三册血型血清学辅导.ppt

常用的血型血清学技术 （4）血型鉴定试剂 过去：血型试剂来自于人或动物中自然产生或免疫产生的多克隆抗体。 现代：血型试剂主要通过杂交瘤细胞技术获得单克隆抗体，单克隆抗体的优点是产量高、特异性强；必须按制造商的说明使用和贮存，因它们是用标准化稀释剂精心制备，对pH等改变非常敏感。 化学修饰鉴定试剂：如一种IgG抗体经化学修饰，成为如同IgM凝集性质的抗体。 常用的血型血清学技术 （5）用于鉴定试验的红细胞 应从新鲜标本中制备，并取两个个体细胞混合 ； 需要用盐水洗涤，以除去血浆或血清和小的凝块，还可除去溶血细胞； 洗涤红细胞用盐水悬浮，悬液细胞浓度通常为2-4%。 常用的血型血清学技术 （6）抗血清和红细胞的保存、质控 抗血清通常贮存在4℃，如冰冻保存不能反复冻融，解冻后混匀使用；投入常规使用之前，每批抗血清应作一套质控对照，投入使用后，每批试验或至少每天一次进行质控对照。 反定型用的红细胞最好每天制备，在4℃保存可用两天，如有溶血和变色应废弃；试剂红细胞在使用前也应作一套质控对照，同样每批实验也应作质控对照。 ABO和RhD鉴定 （1） ＊ ABO血型的正反定型： 正定型：用已知抗A、抗B定型血清鉴定未知的红细胞上抗原。 反定型：用已知A、B、O试剂红细胞鉴定未知的血清中抗体。 ABO和RhD鉴定 （2） 献血者的鉴定： 每次献血都应用抗A、抗B和抗AB作细胞鉴定； 用A、B和O试剂红细胞作反定型； 至少用一种抗D血清作RhD定型； 阴性者须作DU型鉴定。 ABO和RhD鉴定 （3） 患者的鉴定： 患者的红细胞应用抗A和抗B测定； 血清或血浆用A、B、O细胞测定； 应用一种抗D血清作RhD测定； 阴性者不必作DU型鉴定。 ABO和RhD鉴定 （4） DU型鉴定技术： 3-5种不同批号或不同厂家的抗D试剂（适合作间接抗球蛋白实验）； 作间接抗球蛋白实验。 血型鉴定遇到错误的主要原因 标化和储存不佳的抗血清； 钱串形成：是一种假凝集； 血样本的污染：应抽取新鲜样本作血型鉴定。 华通胶（脐带胶样组织）； 自身抗体和冷反应抗体； 不良技术：血型鉴定错误主要是由于不良技术所致。 间接抗球蛋白试验 （1） ＊原理：抗体与红细胞上相应抗原结合但未产生可见凝集时，加入抗球蛋白血清显示该抗体和其红细胞受体的结合； ＊用途：是抗体测定最敏感的技术，可用于血清中游离的IgG抗体检测、 RhD鉴定、不完全抗体交叉合血等。 操作步骤：致敏或包被和孵育、洗涤、抗球蛋白试剂的加入。 间接抗球蛋白试验 （2） 间接抗球蛋白试验假阳性的原因： （1）试管中灰尘和微粒的存在。 （2）从一个管到另一个管的交叉污染。 （3）离心试管速度太快或时间太长。 间接抗球蛋白试验 （3） 间接抗球蛋白试验假阴性的原因：（1）没有彻底洗涤红细胞。（2）没有加入抗人球蛋白试剂（AHG）。（3）脏的试管。（4）在血清或细胞中存在小凝块。（4）使用pH错误的盐水。（5）以错误的速度离心试管。（6）洗涤后到加抗球蛋白试剂之前，时间间隔过长。（7）加AHG后读结果前中断了试验。 直接抗球蛋白实验 ＊用途：检测患者红细胞表面结合的抗体（IgG)。 导致直接抗球蛋白试验阳性的条件： （1）自身免疫溶血性贫血，患者体内抗体与自身红细胞反应。 （2）溶血性输血反应，患者体内抗体破坏输入的红细胞。 （3）新生儿溶血病，母亲的IgG抗体经过胎盘在婴儿体内破坏婴儿的红细胞。 白蛋白加入试验（分层法） 用途：当获得AHG试剂困难，或是某些RhD鉴定可用此法替代间接抗球蛋白试验。 操作步骤可分为两步： （1）血清和细胞在37℃孵育，红细胞将被存在的抗体包被（IgG或IgM）； （2）沿试管壁加入白蛋白不要激起细胞，再孵育10-15分钟，如红细胞已被抗体包被，白蛋白会引起包被红细胞的凝集。 配血试验（1） ＊配血试验的要求： 配血试验的技术程序应尽可能简单而又不影响其准确性； 如患者体内无免疫性抗体存在，室温盐水技术可测定ABO不相溶的情况； 抗球蛋白试验具有高敏感性能测定所有抗体，应将该试验用于每一个配血试验，如不能做到可使用白蛋白（分层）技术； 配血试验不能使用玻片法 。 配血试验（2） ＊配血试验的主要内容：（1）检查患者血样（2）使用可靠的试剂（3）配血试验使用间接抗球蛋白技术，或室温盐水试验与37℃进行白蛋白加入试验。（4）在配血中如未发现凝集和溶血，则血液是配合的，如有凝集或溶血，该血液不配合。（5）不配合情况下，检查患者和献血者血型鉴定是否有错，如无错应重作配血试验，进一步用多袋血作配血试验，找到配合的血液可发出。 配血试验（3） 交叉配血主要技术： （1）一管法配血，立即离心和IAT法 （2）使用LISS的一管法配血 （3）白蛋白加入法和室温盐水技术