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蝴蝶兰的组织培养 　蝴蝶兰[phalaenopsis ]为兰科蝴蝶兰属植物,它是一种热带气生兰,俗称“洋兰”。蝴蝶兰花型似蝴蝶,形态美妙、色彩丰富、花期长,在热带兰中素有“兰花皇后”之美称,。蝴蝶兰种类丰富,分布广,东起菲律宾、新几内亚,南达澳大利亚北部,西苏门答腊,北到我国台湾、云南、四川西部均有原种(野生的蝴蝶兰) 存在,约有50 多种,其中我国有7 种,全部为附生兰。蝴蝶兰商品化大规模栽培十分成功，是近年来在国际花卉市场上最受欢迎的洋兰。从离体器官诱导产生类原球茎，通过类原球茎的增殖培养，得到大量幼苗，为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础。类原球茎是一类呈珠粒状的幼嫩器官（种子萌发时先是胚的膨大,种皮破裂,一定时间后发育成肉眼可见浅黄色的原胚呈球状,称为原球茎，由其它外植体诱导产生的称类原球茎），在兰科植物中多以这种器官发育、增殖和分化。蝴蝶兰的组培快繁有胚培养、叶片培养和腋芽培养,腋芽培养形成试管苗,再以丛生芽的方式增殖快繁,可以有效地保持母本的优良性状,变异率最低。 材料与方法 （1）材料 取已过盛花期带休眠芽的花梗作为外植体材料。 （2）材料消毒与接种 切下其带芽茎段,长约2 - 3cm ,用自来水清洗干净,在饱和漂白粉上清液中浸泡15 min ,浸泡时不断搅动,浸泡后的茎段用流水冲洗干净,置于超净工作台上,先用75 %的酒精消毒30 s ,无菌水清洗1 次,再用0. 1 %的升汞浸泡10 min ,经无菌水冲洗数次,将带芽茎段接种到经设计的不同激素组合的诱导培养基上,重复3 。 （3）培养基的配制 花梗腋芽诱导培养基为1/ 2MS +BA2. 5 mg/ + NAA0. 2 mg/L 。 增殖培养基为1/ 2 MS + BA3. 5 mg/ + KT1. 0 mg/L + NAA0. 5 mg/L + 椰乳10 %。 生根培养基为1/ 2MS + BA1. 5 mg/ +NAA0. 3 mg/L + 80 g/L 香蕉泥 以上培养基p H 均为5. 5 2 结果 在培养条件每天光照12 h ,光强1 600Lx ,温度25 ±2 ℃获得以下效果。 （1）诱导培养效果：蝴蝶兰花梗接种到不同激素浓度的培养基上,生长1 周后在花梗的基部有褐色物质产生,腋芽开始萌动,1 月后腋芽可以长到1. 5 cm 高，出芽率可达50％。 （2）增殖培养效果：将长出的芽选取约1. 5cm 的苗，取出后切去叶片和基部褐化部分,转接到增殖培养基中,40 d 后，增殖倍数可达到3倍以上。 （3）生根培养效果：将高约2. 0 cm 的蝴蝶兰试管苗接种到生根培养基中, 50 d 后，全部生根，平均生根3.5条，长2.5cm。 （4）壮苗培养与驯化移栽：壮苗。生根组培苗壮苗培养基1/2MS+ 蔗糖10g/L+ 琼脂粉3.5 g/L+ 活性炭1.5 g/L ，pH5.4，温度( 25±2) ℃, 光照强度2000Lx, 光照时间14h/d。培养15d 后移栽。驯化：室内开瓶炼苗3d＋室外炼苗3d。 移栽基质：最适合的栽培基质为水苔，椰糠也是良好的移栽基质。 讨论 （1）蝴蝶兰和其他兰科植物一样,在组培快繁生产中存在着易褐化死亡的问题,因此如何克服褐变成了组培快繁生产成功与否的关键，活性炭2 g/L ,或PVP 1 g/L效果显著；适时切除培养物的褐化部分并及时更换新鲜培养基，能有效抑制外植体褐变死亡；培养基中加入10%椰子水，也能促进原球茎的生长，减少原球茎增殖过程中的褐变；蝴蝶兰的群体效应很明显，单芽容易褐化死亡，且增殖较慢，因此，刚诱导出的原球茎状体不能过早切割转移，在继代阶段接种时，应尽量避免切成单芽，增殖时切块也不宜过小，否则容易褐化死亡；添加香蕉汁对蝴蝶兰原球茎形成及幼苗生长具有明显的促进作用。 （2）另有报道：蝴蝶兰原球茎的诱导主要受外植体、培养基和培养条件等因素的共同影响,其中,外植体最难以控制,这与外植体本身的生长发育和生理生化状态有关。因此,对外植体的筛选是组培中较关键的技术。蝴蝶兰组织培养过程中,采用同样培养基处理时,茎尖比叶片、花梗侧芽作为外植体效果较好。)在激素浓度相同条件下, 1 /2MS、MS、White、B5 作为基本培养基均能诱导出原球茎,但MS效果最好,且诱导的原球茎数量多,密度大。以MS作为基本培养基对蝴蝶兰原球茎进行增殖培养,NAA 1. 00 mg/L和6BA 2. 00 mg/L时,增殖效果最好。蝴蝶兰生根过程中,在1 /2MS培养基上根生长最快,生根率可达94. 42%,根长可达0. 86 cm,长势最粗壮,数量最多,说明低浓度的盐分有利于侧根发生。基本培养基中添加蔗糖浓度为3%,琼脂为6. 00 g/L,活性炭为1. 00 g/L; pH值为5. 60 ～5. 80;培养