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PAGE PAGE 1  研究報告書 編 號：BB07 作 者：劉翰璇 作品名稱： 線蟲捕捉菌Arthrobotrys musiformis調控捕捉網之分化及其黏液之基因之選殖和特性界定 指導教師：孫譽真老師  英文摘要 Nematophagous fungi can form different kind of trapping device to trap the nematodes when they show off. They may play a role for control of the plant and animal parasitic nematodes as an alterative choice beside regular practice. We attempt to investigate the adhesive’s attributes and the genes that encode trapping structures. Now we have already constructed the Arthrobotrys musiformis Fosmid library which will play a vital resource for specific genes analysis, cloning and characterization in the future. We have chosen two genes encoding protease and superoxide dismutase from Arthrobotrys musiformis, respectively, and will be used as probes to screen the Fosmid library. The relevent clone(s) will be subject to restrictive enzyme disection, Southern blotting or even whole Fosmid 40kb DNA fragment sequencing to discover the interesting and paramount genes. 中文摘要 線蟲捕捉菌在線蟲出現時可以產生型態各異的捕捉構造，捕捉或黏著線蟲。它是防治線蟲的另類選擇。本實驗是由生物的分生觀點切入，希望能夠了解線蟲捕捉菌Arthrobotrys musiformis於捕捉網表面之黏液生化特性以及控制產生捕捉構造的基因。目前已完成建構Arthrobotrys musiformis之Fosmid library，並且選擇兩組探針：蛋白質酶(protease)以及超歧氧化酶(superoxide dismutase)，將以PCR進行基因探針之DIG標定，之後篩檢Fosmid library，選殖出相關clone，進行限制酶切割，南方氏雜合特性分析或40kbDNA全序列分析，尋找相關基因以利下游實驗工作之進行。 前言 線蟲為植物四大病原之一，常侵染作物造成嚴重之經濟損失，以化學藥劑來消除線蟲，雖然立竿見影成效很大，不過農藥殘存在土壤中造成污染，破壞生態平衡。而在真菌界中，有一類線蟲之天敵－－線蟲捕捉菌，其可產生型態各異的捕捉構造，於線蟲出現時，可用以捕捉或黏著線蟲。目前，利用線蟲捕捉菌防治家畜(如牛、羊)寄生線蟲已初見成效，而用於防治植物寄生性線蟲，則受生態逆境影響，其防治效果略遜，但就長遠之生態平衡而論，生物防治仍然是未來有機農業，用以防治線蟲病害之較佳選擇。 本實驗是希望由生物的分生觀點切入，能夠探討線蟲捕捉菌Arthrobotrys musiformis於黏著網(圖一)表面之黏液生化特性以及控制產生捕捉構造的基因。 右左 右 左 圖一、線蟲捕捉菌Arthrobotrys musiformis之捕捉網。左圖為光學顯微鏡（光圈4.8，曝光時間1/4秒）；右圖為螢光顯微鏡對應照片（光圈4.8，曝光時間1/15）。(宋，2003) 研究方法 主要是從有或無產生捕捉構造之菌體來萃取蛋白質之後跑二維電泳，比較出相異的蛋白質點，將基因組成之氨基解序之後，至NCBI資料庫比對是否有類似之胺基酸序列，然後在由胺基酸序列回推至核酸序列，設計探針，選殖相關的DNA、cDNA片段,同時建構一Fosmid library(所插入之DNA片段大小大約40kb)，或應用以完成全序列分析之Arthrobotrys musiformis之轉入蛋白酶(protease)以及超歧氧化酶(superoxide dismutase)之兩個基因，利用