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附件2兽用 通用名 猪伪狂犬病毒gE糖蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒 商品名 无 英文名 Blocking ELISA Test Technique for the Detection of Specific Antibodies of the gE Glycoprotein of the Aujeszky’s Disease Virus in Pig Serum 汉语拼音Zhuweikuangquanbingdu gE Tangdanbai Zuduan ELISA Kangti Jianceshijihe 【性状】 （1）抗原包被板 表面光洁、无裂纹、无异物，96孔/块，5块/盒。 （2）阳性对照血清 淡黄色澄清溶液，无臭、无味、无沉淀物，装量2ml/管，1管/盒。 （3）阴性对照血清 淡黄色澄清溶液，无臭、无味、无沉淀物，装量2ml/管，1管/盒。 （4）结合物溶液 淡红色澄清溶液，无臭、无味、无沉淀物，装量60ml/瓶，1瓶/盒。 （5）底物溶液 无色或淡黄色澄清溶液，无沉淀物，装量60ml/瓶，1瓶/盒。 （6）样品稀释液 无色澄清溶液，无臭、无味、无沉淀物，装量50ml/瓶，1瓶/盒。 （7）10倍浓缩洗涤液 无色澄清溶液，无臭、无味、无沉淀物，装量100ml/瓶，2瓶/盒。 （8）终止液 无色澄清溶液，无沉淀物，装量60ml/瓶，1瓶/盒。 用于检测猪伪狂犬病病毒gE糖蛋白抗体。 1 用法 1.1 洗涤液配制：使用前将10倍浓缩洗涤液恢复至室温（20~25 ），并摇动使沉淀溶解（最好在28~37水浴中加热10~15分钟）。然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释（如需配200ml的洗涤液，取20ml的10倍浓缩液加入到180ml的蒸馏水或去离子水中），混匀。稀释好的洗涤液在2~8条件下可保存3天。 1.2 血清稀释：待检血清和对照血清在抗原包被板上进行1:2稀释（如先在抗原包被板中加入50μl样品稀释液，再加入50μl待检血清或对照血清）。 1.3 洗板程序：推荐使用自动洗板机。如果采用人工洗板方式，每次洗涤需遵循以下步骤：（a）倒置反应板弃去孔中液体；（b）每孔加入300μl洗涤液；（c）充分振摇洗涤板孔；（d）倒置反应板弃去孔中液体。最后一次洗涤时可将洗涤液保留在孔中，直到下一步骤需添加的试剂配制完成再弃去。 1.4 操作步骤 1.4.1取出抗原包被板，在相应孔分别加入稀释好的待检血清和对照血清各100μl。阴性对照和阳性对照各设2孔。（按照1.2直接在抗原包被板孔上稀释待检血清和对照血清）。 1.4.2 用封板膜密封抗原包被板，可选择以下两种方式之一进行孵育：（a）36~38下孵育1小时；（b）2~8下孵育15~24小时。 1.4.3 揭去封板膜，按1.3洗板3次，倒置反应板弃去洗涤液，在吸水纸上拍干。 1.4.4 每孔加入结合物溶液100μl。 1.4.5 用封板膜密封抗原包被板，36~38下孵育30分钟。 1.4.6 揭去封板膜，洗涤3次，方法同1.4.3。 1.4.7 每孔加入底物溶液100μl，轻轻摇晃抗原包被板混匀2秒种。 1.4.8 室温（20~25）下避光显色15分钟。 1.4.9 每孔加入终止液100μl，轻轻敲弹抗原包被板的边缘混匀，15分钟内测定结果（测定前用软布擦拭板底部清除灰尘，确保板面的清洁。酶标仪空气调零，读值）。 2 判定 在酶标仪上测定各孔OD450nm值。试验成立的条件是：阴性对照孔OD450nm算术平均值与阳性对照孔OD450nm算术平均值差异应大于0.6；且阳性对照孔的抑制百分数（IN%）应大于60。 应用下列公式分别计算阳性对照孔和样品孔的抑制百分数（IN%）： IN% = 阴性对照孔OD450nm算术平均值 – 阳性对照孔OD450nm算术平均值 ×100 阴性对照孔OD450nm算术平均值 IN% = 阴性对照孔OD450nm算术平均值 – 样品孔OD450nm ×100 阴性对照孔OD450nm算术平均值 如果样品孔的IN%小于40.0，则判为阴性；如果IN%大于或等于40.0，且小于或等于45.0，则判为可疑；如果IN%大于45.0，则判为阳性。 【注意事项】 （1）所有试剂置于2~8保存，禁止冻结。未使用的板条应置于2~8含有硅胶的塑料袋中，以防受潮损坏。 （2）不要使用超过有效期限的试剂，不同批次试剂盒的组份不得混用。 （3）底物溶液不能暴露于强光或任何氧化剂。TMB底物对痕量的污染十分敏感，一旦吸出不得再回收到瓶中。 （4）终止液中含有硫酸，具有腐蚀性。操作人员在整个试验过程中均应戴手套，谨慎操作。