正常和肿瘤组织细胞的培养__幻灯片.pptVIP

正常和肿瘤组织细胞培养 Bin Lu Attardi Institute of Mitochondrial Biomedicine 内 容 上皮细胞的体外培养 上皮细胞的基本特征： 1.上皮组织的形态结构 群体依赖性（population dependence) 接触抑制（contact inhibition) 2.上皮细胞的极性 贴壁依赖性细胞-贴壁生长 生长基质 3 . 上皮细胞间的连接 体外培养的上皮组织细胞的生长生物学 1. 形态学结构： 均质性、透明性很强，结构不明显 2. 体外培养上皮组织的生长与增殖特征 (1) 体外培养的特殊条件： 防范微生物污染 生长基质的支持 特殊的培养基 M199 RPMI1640 DMEM Fam F12 无血清培养基 去成纤维细胞 (2) 体外培养上皮细胞的形态学变化 体外培养上皮组织细胞的观察与检测 1. 一般形态学观察 光镜： 形态、轮廓、生长情况等。 细胞规则、明亮而饱满、细胞轮廓不清 电镜： 桥粒、形态结构特征、细胞间关系 培养液pH变化： 颜色变化？ 培养物的污染情况： 透明度变化？ 2. 组织化学与免疫组织化学观察与检测 酶类： 碱性磷酸酶 琥珀酸脱氢酶 特异性抗原标记物： 角蛋白、上皮细胞膜抗原 VIII因子、晶体蛋白、唾液酸糖蛋白 血管内皮细胞的体外培养 人脐静脉内皮细胞（HUVECs)的培养 组织来源： 婴儿脐带 培养用液： M199+20%FCS D-Hanks 0.1%胶原酶溶液 2.培养方法： (1) 关于接种材料的制备 取材与消化 消化酶、浓度、时间 (2) 排除成纤维细胞 传代去除法 加肝素培养法(90u/ml) 刮除法 (3) 关于培养液 (4) 关于传代培养 (1) 光镜检查 (2) 透射电镜检查： W-P小体 (3) VIII因子相关抗原的免疫组化检测 巨噬细胞的培养 巨噬细胞的培养 动物： 小鼠、大鼠、兔、人 培养基： Eagle MEM RPMI1640 HamF12 常用的巨噬细胞： 肺泡和腹腔巨噬细胞 获取巨噬细胞的方法 （一）肺泡巨噬细胞 支气管肺泡灌洗法 支气管镜肺泡灌洗法 （二）腹腔巨噬细胞 1. 小鼠腹腔巨噬细胞的获取： (1)主要材料： 实验动物: 6周龄小鼠 培养液： 10%FCS RPMI1640 巨噬细胞的纯化 1、原理： 巨噬细胞黏附能力强、贴壁快特点 2. 方法： 用贴壁法纯化巨噬细胞 用不连续密度梯度离心纯化巨噬细胞 巨噬细胞的接种和培养 （一）主要材料： 培养液：