洋葱根尖染色体观察.doc

大蒜根尖多倍体诱导与染色体观察 2、 掌握大蒜根尖制片的方法。 3、 通过对玻片的观察，统计染色体数目。 4、 对比不同的大蒜根尖染色体数目，理解二倍体和四倍体的区别。 实验原理： 1.有丝分裂 完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S期（合成期）、G2期（合成后期）和M期（分裂期），其中G1期、S期和G2期合称间期，细胞完成DNA的复制以及有丝分裂的准备，而M期又可以分为前期、中期、后期和末期，为了形态观察的方便，本实验采用后一种分法。观察有丝分裂，重点在于观察染色体的形态。在细胞分裂前期，细胞核解体，染色质凝聚显现出染色体的形态；在前中期，染色体散乱地分布于细胞的中部；在中期，纺锤体形成，染色体受到微管的牵引，着丝粒成行排列于赤道板上；在后期，染色体受到动粒微管的牵引，向细胞两级运动；在末期，染色体重新解螺旋，细胞核重新形成。细胞染色体过程示意图见图1. 图1：细胞有丝分裂过程示意图 2.大蒜的根尖 大蒜根尖的整体结构如图2，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。 图2：大蒜根尖结构示意图 3.多倍体诱导 秋水仙素易溶于冷水、不易溶于热水、有毒、针状结晶或淡黄色粉末，是诱导多倍体的一种常用试剂，其是从百合科植物秋水仙的鳞茎和种子中提取出来的一种生物碱。它的作用机理是与微管蛋白单体结合，抑制微管的形成，进一步抑制纺锤体的形成，使染色单体分离受阻，形成同源多倍体。因此，秋水仙素作用于正在分裂的细胞，如生长点才能产生作用，诱导多倍体的形成。秋水仙素诱导多倍体在蔬菜和观赏植物的应用非常广泛，但是在大蒜方面的报道却很少。 图3：秋水仙素的化学结构式 实验器材： 实验材料： 经秋水仙素处理过的大蒜根。（秋水仙素溶液配制 取秋水仙素1g（先用少量95%乙醇助溶），溶于250～500ml蒸馏水中，配成浓度为0.2～0.4%的溶液，冰箱中保存。将大蒜架在盛水的烧杯中进行水培。待根尖长到1cm时，将大蒜盛在0.4%秋水仙素溶液的瓶盖或小烧杯上，避光处理24小时，然后再水培24小时加倍后根尖很肥大。） 实验试剂：1mol/L的HCl溶液，改良苯酚品红溶液。 实验器材：取材：取大蒜发根至.5-1cm，然后转入盛有.15%秋水仙素水溶液的培养皿中继续培养，待观察到根部有膨大。（-18小时） 固定：在卡诺固定液中固定，移%乙醇中保存备用 解离：植物的分生组织需要经过处理细胞之间的果胶层并使软化，组织才能压片步骤顺利进行。 ：固定的材料用清水洗涤之后，用水中恒温处理min，在酸解过程中一定要掌握好温度和时间若解离不够，则压片不易分散。若解离，在下一步处理材料材料过软而。 ：，每次一到二分钟。 ：用改良苯酚品红染色-15分钟。 ：将染色后的材料盖上盖玻片，在盖玻片上盖上两层吸水纸，用一个双面刀片，插到盖片与玻片之间的一角，用左手食指压紧盖片，防止滑动，用右手持解剖针，用针柄轻敲盖片，使均匀分散开，然后将刀片轻轻撤出，再用针柄重敲盖片，使细胞分散压平。 四倍体细胞与二倍体细胞 结果 一、观察： 染色体 多倍体（1）显微镜下观察 ）显微镜下观察 　 实际值 实际计数值 相对偏差 二倍体 16 -- 0 多倍体（1） 32 29 9.37% 多倍体（2） 32 30 6.25% 结论：实际计数值与实际值偏差，压片不充分，使得染色体容易出现重叠，，情况。拓展 ：1937年布莱克斯和埃佛里采用曼陀罗等植物发现用秋水仙素诱导多倍体的方法后, 广大育种工作者开始探索多倍性育种技术手段,多倍体植株叶片大而厚, 颜色深邃,花朵大而质地加重, 花期延长等外观特征符合现代育种目标,增加了花卉的观赏价值和商品价值, 带动了花卉产业的迅速崛起。现有的技术手段中,通过秋水仙素人工化学诱变的方式仍然被认为是最有效、成绩为显著的一条途径, 其具有经济方便、诱变作用专一和诱变突变广泛等特点, 一直沿用至今。如在金丝杜鹃、大波斯菊、草夹竹桃、矮牵牛、毛地黄、紫茉莉、金莲花、金鱼草、鸡冠花、挂竹香等植物中都通过秋水仙素诱导成功, 已获得了同源四倍体植株。在提高观赏价值的同时也获得了巨大的利益。 应用前景： 随着研究的进一步深入, 用秋水仙素加倍还存在着一些亟待解决的问题: 缺陷问题。秋水仙素诱变产生的第一代多倍体, 基因平衡遭到破坏, 存在一些缺陷, 如孕性低、种子不饱满、生长期较长、开花较晚等。因此不能直接用于生